rAAV2介導(dǎo)IGF-1基因治療聯(lián)合康復(fù)訓(xùn)練對(duì)大鼠脊髓損傷修復(fù)作用的研究.pdf

1、研究目的：
　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠進(jìn)行脊髓損傷造模后，應(yīng)用重組腺相關(guān)病毒載體（rAAV2）介導(dǎo)胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）基因治療和康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合干預(yù)。采用運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分、組織學(xué)和免疫組化等技術(shù)，觀察大鼠脊髓損傷修復(fù)過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)后肢運(yùn)動(dòng)功能、損傷脊髓局部神經(jīng)元數(shù)量、損傷組織IGF-1表達(dá)等指標(biāo)。比較單純基因治療、單純康復(fù)訓(xùn)練和基因治療聯(lián)合康復(fù)訓(xùn)練對(duì)脊髓損傷的修復(fù)效果，豐富相應(yīng)研究資料。
　　研究方法：
　　研究對(duì)象為9

2、0只雄性SD大鼠，脊髓損傷造模后隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組、自然愈合組、康復(fù)訓(xùn)練組、基因治療組、聯(lián)合治療組（基因治療聯(lián)合康復(fù)訓(xùn)練）；各組再分別設(shè)14d組、28d組、42d組（每組6只）?；蛑委熃M造模后24h脊髓注射3ul重組腺相關(guān)病毒，康復(fù)訓(xùn)練組造模后7d進(jìn)行游泳訓(xùn)練，聯(lián)合治療組同時(shí)施加上述兩種治療方法。跟蹤測(cè)試各組不同時(shí)間點(diǎn)下列指標(biāo)：脊髓組織形態(tài)變化、IGF-1表達(dá)、脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)量，后肢運(yùn)動(dòng)功能BBB評(píng)分、斜扳試驗(yàn)評(píng)分。其中BB

3、B評(píng)分和斜板實(shí)驗(yàn)分別于造模后1d、3d、7d、14d、28d、42d測(cè)試，組織學(xué)和免疫組化取材時(shí)間點(diǎn)為14d、28d、42d游泳訓(xùn)練后2h。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　研究結(jié)果：
　　（1）重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的GFP綠色熒光蛋白能夠在脊髓組織損傷區(qū)域的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中廣泛表達(dá)，對(duì)照組無(wú)表達(dá)。
　?。?）傷后各組IGF-1表達(dá)都顯著高于假手術(shù)組（P<0.05）；隨修復(fù)時(shí)間14d、28d、42

4、d自然愈合組呈下降趨勢(shì)，到第42d基本接近正常水平。其余各組表達(dá)穩(wěn)定，組內(nèi)比較無(wú)顯著下降；第42d各組IGF-1量由高到低為聯(lián)合治療組、基因治療組、康復(fù)訓(xùn)練組、自然愈合組、假手術(shù)組，各組間差異非常顯著（P<0.05）。
　?。?）傷后各組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)量均非常顯著低于假手術(shù)組（P<0.01）；14d、28d、42d各組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)量無(wú)明顯變化，組內(nèi)比較無(wú)顯著差異；第42d運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活數(shù)由高向低為：聯(lián)合治療（68%）、基因治療組（6

5、6%）、康復(fù)訓(xùn)練組（39%）、自然愈合組（17%），除聯(lián)合治療組和基因治療組無(wú)顯著差異外，其余各組間差異非常顯著（P<0.01）。
　?。?）各組BBB評(píng)分和斜板評(píng)分趨勢(shì)相同，于造模后降到最低，此后緩慢升高。1d、3d、7d各組間運(yùn)動(dòng)評(píng)分無(wú)顯著差異。第14d和28d，聯(lián)合治療組BBB評(píng)分和斜板評(píng)分非常顯著高于其余各組（P<0.01）；康復(fù)訓(xùn)練和基因治療組也顯著高于自然愈合組（P<0.01），但兩組間無(wú)差異；第42d各組運(yùn)動(dòng)評(píng)分由高

6、向低為聯(lián)合治療組、康復(fù)訓(xùn)練組、基因治療組、自然愈合組，除康復(fù)訓(xùn)練與基因治療組差異為顯著外（P<0.05），其余各組差異均非常顯著（P<0.01）。
　　研究結(jié)論：
　?。?）重組2型腺相關(guān)病毒（rAAV2）能夠高效感染脊髓神經(jīng)組織，并介導(dǎo)外源基因長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，是脊髓損傷基因治療的理想載體。
　　（2）康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合rAAV2-IGF-1基因治療能夠保護(hù)脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元免于死亡，促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)，其效果優(yōu)于單純的康復(fù)訓(xùn)