NFAT家族在肺癌中的表達(dá)和功能研究.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子NFAI、家族(nuclear factor of activated T cells，T細(xì)胞活化核因子)的功能在細(xì)胞增殖、發(fā)育與分化和腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中已被報道，但在肺癌中的研究國內(nèi)外尚未報道。 本研究中，選取130例腫瘤和正常的配對的原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌組織，采用免疫組織化學(xué)的方法檢測NFAI、蛋白的表達(dá)狀況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NFAq、蛋白在96例腫瘤組織中表達(dá)(73.8％)，在64例正常組織中表達(dá)(49.2％)，在85例腫

2、瘤組織中較配對的正常組織中高表達(dá)(65.4％)，其中，在48例腺癌和37例磷癌中高表達(dá)。結(jié)合病理資料用SPSS軟件統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，NFAT蛋白的表達(dá)狀況和肺癌的侵犯(p=0.031)、病理類型(p=0.0001)和吸煙史(p=0.024)和分化程度(P=0.045)有關(guān)，與病理分期(pTNM)、家族史和五年生存無相關(guān)性。經(jīng)多變量回歸分析發(fā)現(xiàn)，NFAT家族蛋白的高表達(dá)與吸煙史(p=0.009)和病理類型(p=0.0001)相關(guān)。 采用R

3、T-PCR方法在30對2004-2005期的腫瘤和正常配對的原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌組織中檢測NFAT家族成員的表達(dá)狀況，結(jié)果是NFATcl和NFATc3在腫瘤中高表達(dá)，其比例分別是60％和66.7％，基本上與免疫組織化學(xué)染色結(jié)果一致(60％)，揭示NFAT蛋白在原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌組織的異常表達(dá)可能是由于NFATcl和NFATc3在mRNA水平的高表達(dá)引起。 采用測序的方法在上述30例腫瘤組織中篩選NFATcl和NFATc3N端調(diào)控區(qū)

4、域的突變情況，結(jié)果在NFATcl的第二個外顯子中篩選到了4個SNP同義位點(diǎn)，其中一個已在SNP數(shù)據(jù)庫中有收錄，另外3個是首次發(fā)現(xiàn)，揭示突變可能不是NFAT蛋白在原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌組織中異常表達(dá)的原因。 為了進(jìn)一步研究NFMT家族在肺癌中的作用機(jī)制，篩選了NFAT蛋白在7株肺癌細(xì)胞系中的表達(dá)狀況。細(xì)胞免疫化學(xué)和RT-PCR的方法檢測發(fā)現(xiàn)，NFAT家族在Anip973、A549、H520和H460細(xì)胞系中表達(dá)相對較高，而在Glc-8

5、2和H460細(xì)胞系中表達(dá)較低。經(jīng)NFAT-luciferase報告基因分析后，NFAT蛋白的轉(zhuǎn)錄活性在Anip973、A549、H520和H460細(xì)胞系中相對較高，在Glc-82和H460細(xì)胞系中表達(dá)較低，基本上與NFAT的表達(dá)狀況一致。加入CsA和FK506后，NFAT的轉(zhuǎn)錄活性在Anip973有所下降，但在A549、H520和H460中卻有所上升；加入Ionomycin及其與CsA和FK506的組合后， NFAT的轉(zhuǎn)錄活性在Anip