SCF對(duì)高糖環(huán)境下膀胱cajal樣間質(zhì)細(xì)胞c-kitmRNA及蛋白表達(dá)影響.pdf

1、目的：通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）及激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)技術(shù)，檢測(cè)SCF干預(yù)對(duì)高糖環(huán)境下體外培養(yǎng)的豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit mRNA及蛋白的表達(dá)，探討SCF干預(yù)對(duì)高糖環(huán)境中已發(fā)生形態(tài)、機(jī)能變化的豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞表型、功能逆轉(zhuǎn)的可能性和可行性。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)膠原酶酶解法分離、提取、純化豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞并培養(yǎng)24小時(shí)后，分別加入不同葡萄糖濃度（15mmol/L

2、、30mmol/L）培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)后（c-kit明顯降低時(shí)期），然后分別加入不同SCF濃度（50 ng/ml、100 ng/ml）培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)或72小時(shí)。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit mRNA含量；應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）檢測(cè)膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)c-kit mRNA含量和蛋白表達(dá)各單純高糖

3、對(duì)照組均比正常對(duì)照組明顯下降（p<0.01）；24小時(shí)組，SCF50ng/ml干預(yù)組c-kit mRNA含量和蛋白表達(dá)較高糖15mmol/L對(duì)照組無(wú)差異（p>0.05），SCF100ng/ml干預(yù)組c-kit mRNA含量和蛋白表達(dá)較15mmol/L高糖對(duì)照組升高（p<0.05），SCF50ng/ml、SCF100ng/ml干預(yù)組c-kit mRNA含量和蛋白表達(dá)較30mmol/L高糖對(duì)照組均無(wú)差異；72小時(shí)組，SCF50 ng/ml、

4、SCF100ng/ml干預(yù)組c-kit mRNA含量和蛋白表達(dá)均較15mmol/L高糖對(duì)照組明顯升高（p<0.01），SCF50 ng/ml、SCF100 ng/ml干預(yù)組c-kit mRNA含量和蛋白表達(dá)較30mmol/L高糖對(duì)照組升高（p<0.01）。
　　 結(jié)論：微環(huán)境高糖環(huán)境可導(dǎo)致體外培養(yǎng)的豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞c-kit表達(dá)下降，從而使SCF/c-kit信號(hào)通路受阻，在微環(huán)境中加入高濃度SCF刺激后，可促進(jìn)高糖環(huán)