候選抑癌基因CHD5在乳腺癌中的遺傳分析及初步功能研究.pdf

1、乳腺癌是一種十分常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年上升，并呈年輕化的趨勢，極大地威脅著女性的健康。近年來，盡管已發(fā)現(xiàn)很多乳腺癌相關(guān)的癌基因及抑癌基因，但癌癥的總體治愈水平并沒有顯著上升。因此，發(fā)現(xiàn)和研究新的乳腺癌相關(guān)基因，尋找到新的診斷及治療靶點，是一項十分迫切且具有重要現(xiàn)實意義的工作。
　　 已有大量文獻報道，人類染色體1p36區(qū)在乳腺癌及其它多種類型的癌癥病人中均發(fā)生缺失，提示該區(qū)域內(nèi)存在一個重要的候選抑癌基因。染色質(zhì)解旋酶DNA

2、結(jié)合蛋白5(CHD5)是Brodeur實驗室2003年新發(fā)現(xiàn)的一個基因，位于染色體1p36區(qū)。2007年，Bagchi等通過對小鼠模型的研究證實，CHD5是1p36區(qū)的抑癌基因。至此，該基因受到越來越多的關(guān)注，各類癌癥中關(guān)于該基因的研究工作也相繼發(fā)表。但乳腺痛中，對該基因的研究還不多見，它和乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有待于進一步探討。
　　 研究內(nèi)容：
　　 本文首先運用PCR擴增、測序的方法，檢測了19個乳腺癌細胞系及38個

3、乳腺癌組織樣本中，CHD5基因40個編碼蛋白的外顯子區(qū)及其兩側(cè)剪切位點的突變情況；然后，運用real－time PCR手段檢測了32個乳腺癌細胞系及58對乳腺癌組織樣本中(包括腫瘤組織及相應(yīng)的癌旁正常組織)CHD5 mRNA表達水平，并分析了CHD5 mRNA表達水平和各項臨床病例指標問的相互關(guān)系。接著，運用亞硫酸氫鈉處理DNA、PCR擴增并測序的方法，檢測了9個乳腺癌細胞系及30個乳腺癌組織樣本中CHD5基因啟動子區(qū)的甲基化情況；最后

4、，在MDA－MB-231乳腺癌細胞系中重新表達CHD5，運用SRB染色、PI染色及流式細胞儀等手段，檢測該細胞增殖及細胞周期的變化。
　　 研究結(jié)果：
　　 在MDA—MB-231乳腺癌細胞系中檢測到一個移碼突變，位于CHD5染色質(zhì)解旋酶/ATP酶結(jié)構(gòu)域。組織樣本中沒有檢測到突變，只發(fā)現(xiàn)一個新的SNP位點；約63％的乳腺痛細胞系及乳腺癌組織樣本中，CHD5 mRNA表達水平均顯著下調(diào)；乳腺癌細胞系及組織樣本中，CHD5基

5、因啟動子區(qū)均存在高甲基化，說明甲基化而非突變是導(dǎo)致CHD5轉(zhuǎn)錄失活的主要原因。另外，在MDA-MB-231中重新表達CHD5后，該細胞增殖變慢。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，G0/G1期細胞比例增加，S期和G2/M期細胞比例相應(yīng)減少，表明CHD5可以將細胞阻滯在S期。
　　 結(jié)論：
　　 本文首次系統(tǒng)研究了乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中，CHD5基因分子水平的變化情況，初步檢測了該基因?qū)毎鲋车挠绊?。結(jié)果表明，乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中，CHD