阻斷SDF-1-CXCR4軸對胰腺癌侵襲轉移的抑制作用.pdf

1、目的：探討胰腺癌組織中CXCR4表達與胰腺癌臨床病理特征的關系；研究胰腺癌細胞株CXCR4表達及與增殖、侵襲的關系；應AMD3100及RNA干擾(RNAi)技術阻斷CXCR4/基質細胞衍生因子-1(SDF-1)受體配體系統(tǒng)，探討阻斷CXCR4/ SDF-1受體配體系統(tǒng)對胰腺癌細胞侵襲轉移能力的抑制作用及其可能機制；觀察胰腺星狀細胞(PSCs)SDF-1的表達，應用AMD3100及SDF-1中和抗體阻斷SDF-1/CXCR4受體配體系統(tǒng)，

2、探討SDF-1/CXCR4受體配體系統(tǒng)在PSCs促進胰腺癌細胞侵襲轉移中的作用。研究SDF-1/CXCR-4受體配體系統(tǒng)在胰腺癌及其PSCs促進胰腺癌侵襲轉移中的作用機制。 方法：①免疫組織化學(IHC)方法檢測胰腺癌及癌旁組織中CXCR4表達；RT-PCR檢測PSCs、胰腺癌組織及細胞系中CXCR4及SDF-1mRNA的表達；Western blot檢測PSCs及胰腺癌細胞株中CXCR4及SDF-1的蛋白表達；共聚焦顯微鏡檢測

3、AsPC-1細胞鈣內流，趨化實驗檢測SDF-1α對AsPC-1細胞遷移的影響。②設計、構建、篩選和鑒定表達CXCR4 shRNA的慢病毒(LV)載體；MTT試驗檢測AsPC-1細胞增殖及生長曲線；細胞體外黏附試驗、遷移及體外侵襲實驗觀察AsPC-1細胞的黏附、遷移及侵襲能力；Western blot檢測檢測AsPC-1細胞中血管內皮生長因子(VEGF)、基質金屬蛋白酶-2(MMP2)及MMP9的蛋白表達；IHC檢測裸鼠移植瘤中微血管密度

4、(MVD)。HE染色觀察裸鼠肺移植瘤。③組織塊法原代分離并培養(yǎng)人PSCs，免疫細胞化學(ICC)檢測PSCs中α-SMA及Desmin表達；ELISA檢測PSCs的上清液中SDF-1α的含量；RT-PCR和Western-blot檢測PSCs中SDF-1表達；MTT試驗檢測AsPC-1細胞增殖及生長曲線；細胞遷移及體外侵襲實驗觀察AsPC-1細胞的增殖、遷移及侵襲能力。 結果：⑴胰腺癌組織中CXCR4的表達在不同TNM分期及淋巴

5、結是否轉移之間有顯著差異；三個胰腺癌細胞株均不同程度地存在CXCR4mRNA及蛋白表達；胰腺癌組織中存在SDF-1表達，三個胰腺癌細胞系中無SDF-1表達；SDF-1α以劑量和時間依賴性促進AsPC-1的鈣內流。⑵SDF-1α促進胰腺癌細胞的增殖、黏附、遷移及侵襲，AsPC-1細胞增加最為明顯，SW1990細胞增加程度最低；AMD3100或RNAi可抑制SDF-1α所致的促增殖、侵襲及黏附作用；AMD3100或RNAi可抑制AsPC-1

6、細胞VEGF、MMP2及MMP9的蛋白表達；AMD3100可抑制皮下移植瘤的生長及MVD； RNAi可抑制AsPC-1體內血行轉移能力。⑶PSCs表達SDF-1，PSCs上清液(PSC-SN)中可檢測到SDF-1α蛋白。加入AsPC-1上清液PSCs表達SDF-1增高，PSCs條件培養(yǎng)液(PSC-CM)可促進AsPC-1的增殖、遷移及侵襲，AMD3100或SDF-1中和抗體可抑制這種效應。 結論：①胰腺癌組織CXCR4的表達與胰