17215.凡納濱對(duì)蝦血藍(lán)蛋白抗腫瘤活性及其功能多樣性的糖分子基礎(chǔ)研究

1、I摘要對(duì)蝦血藍(lán)蛋白是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種與對(duì)蝦免疫防御有關(guān)的多功能蛋白，其具有酚氧化酶活性、抗病毒、抗細(xì)菌、凝集、溶血等多種非特異性免疫學(xué)活性。然而迄今為止，其是否具有抗腫瘤活性尚不清楚，同時(shí)其功能多樣性的糖分子基礎(chǔ)還有待于進(jìn)一步深入研究。為此，本研究在探索對(duì)蝦血藍(lán)蛋白抗腫瘤活性及其分子作用機(jī)制的基礎(chǔ)之上，對(duì)其功能多樣性的糖分子基礎(chǔ)進(jìn)行了較深入的研究，所獲研究結(jié)果具體如下：1、對(duì)蝦血藍(lán)蛋白抗腫瘤活性及其分子機(jī)制研究首先，采用SRB和MTT兩

2、種方法探索對(duì)蝦血藍(lán)蛋白對(duì)Hela細(xì)胞的抗腫瘤活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1050μgmL藍(lán)蛋白處理Hela細(xì)胞48h后，血藍(lán)蛋白對(duì)Hela細(xì)胞的抑制率56.8771.35％，而對(duì)正常的293T細(xì)胞無(wú)抑制活性，且對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制活性隨著血藍(lán)蛋白濃度的上升，對(duì)Hela細(xì)胞的抑制率逐漸提高，呈明顯的濃度劑量效應(yīng)，由此說(shuō)明，對(duì)蝦血藍(lán)蛋白具有抗腫瘤活性。繼而，采用顯微鏡觀察和Dapi染色技術(shù)分析血藍(lán)蛋白對(duì)Hela細(xì)胞和正常細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核的影響，結(jié)果表明，血

3、藍(lán)蛋白能夠使Hela細(xì)胞皺縮、變圓并產(chǎn)生類(lèi)似陽(yáng)性對(duì)照的凋亡小體，而對(duì)正常的293T細(xì)胞沒(méi)有影響。提示，血藍(lán)蛋白可能誘導(dǎo)了Hela細(xì)胞的凋亡。接著，采用細(xì)胞免疫熒光和DNAladder實(shí)驗(yàn)技術(shù)分析血藍(lán)蛋白與Hela細(xì)胞的相互作用以及血藍(lán)蛋白對(duì)Hela細(xì)胞核基因組的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血藍(lán)蛋白能夠與細(xì)胞膜相互結(jié)合并（或者）能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，并能使細(xì)胞核基因組在100bp和300bp左右產(chǎn)生梯狀條帶，進(jìn)一步表明血藍(lán)蛋白可能誘導(dǎo)了Hela細(xì)胞的凋亡。

4、然后，我們采用蛋白質(zhì)組學(xué)的策略鑒定對(duì)蝦血藍(lán)蛋白作用Hela細(xì)胞后主要變化蛋白。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，17個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)水平發(fā)生明顯的變化，其中11個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，6個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)，經(jīng)MALDITOFTOFMS分析和Mot搜索蛋白點(diǎn)1、3、4、5、8、11、13、15、16、17等10個(gè)顯著差異的蛋白點(diǎn)分別鑒定為Edar相關(guān)死亡受體、Hsp60變體、Hsp70前體、YWHAZ蛋白和GTP結(jié)合蛋白R(shí)an等蛋白點(diǎn)，說(shuō)明這些蛋白可能與Hela細(xì)