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1、該文試圖通過比較蘋果旭和其柱型突變體威賽克赤霉素合成限速酶基因序列的差異來探討威賽克柱型突變的可能機(jī)理.應(yīng)用RT-PCR技術(shù),共克隆比較了三個(gè)主要限速酶GA20-氧化酶、古巴二磷酸合成酶(CPS)和內(nèi)根-貝殼杉烯合成酶(KS)的基因片段.使用根據(jù)GA20-氧化酶保守區(qū)設(shè)計(jì)的引物,分別從旭和威賽克克隆到一個(gè)800bp片段,這兩個(gè)片段的推斷氨基酸序列與富士蘋果赤霉素20-氧化酶的一致性均為98.14%.在核酸水平,這兩個(gè)片段僅存在兩個(gè)堿基的
2、差異,其中一個(gè)堿基的變化導(dǎo)致一個(gè)氨基酸位點(diǎn)的改變,即由旭中的蘇氨酸(T)變?yōu)橥惪酥械募琢虬彼?M),從而引起一個(gè)可能的豆蔻基N-豆蔻?;稽c(diǎn)在威賽克中的喪失.這個(gè)位點(diǎn)的突變可能對(duì)該酶的活性和赤霉素的合成水平產(chǎn)生負(fù)影響.根據(jù)CPS基因和KS基因保守區(qū)設(shè)計(jì)的兼并引物,在旭和威賽克中均擴(kuò)增得到符合期望大小的產(chǎn)物.Blast搜索和序列比對(duì)表明擴(kuò)增片段與擬南芥、南瓜、曙南芥等其他來源的CPS基因和KS基因同源性很低,KS擴(kuò)增片段可能為26S r
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