旭與威賽克赤霉素合成限速酶基因片段的克隆與序列分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文試圖通過比較蘋果旭和其柱型突變體威賽克赤霉素合成限速酶基因序列的差異來探討威賽克柱型突變的可能機理.應用RT-PCR技術,共克隆比較了三個主要限速酶GA20-氧化酶、古巴二磷酸合成酶(CPS)和內(nèi)根-貝殼杉烯合成酶(KS)的基因片段.使用根據(jù)GA20-氧化酶保守區(qū)設計的引物,分別從旭和威賽克克隆到一個800bp片段,這兩個片段的推斷氨基酸序列與富士蘋果赤霉素20-氧化酶的一致性均為98.14％.在核酸水平,這兩個片段僅存在兩個堿基的

2、差異,其中一個堿基的變化導致一個氨基酸位點的改變,即由旭中的蘇氨酸(T)變?yōu)橥惪酥械募琢虬彼?M),從而引起一個可能的豆蔻基N-豆蔻?；稽c在威賽克中的喪失.這個位點的突變可能對該酶的活性和赤霉素的合成水平產(chǎn)生負影響.根據(jù)CPS基因和KS基因保守區(qū)設計的兼并引物,在旭和威賽克中均擴增得到符合期望大小的產(chǎn)物.Blast搜索和序列比對表明擴增片段與擬南芥、南瓜、曙南芥等其他來源的CPS基因和KS基因同源性很低,KS擴增片段可能為26S r

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