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文檔簡介
1、由膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的杧果炭疽病是杧果生產中危害性最大的菌物病害之一,對杧果生產造成嚴重的經濟損失和食品安全問題。本研究以綠色熒光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)為標記基因,利用聚乙二醇(PEG)介導轉化法,構建杧果炭疽菌遺傳轉化體系,探索標記菌株與野生菌株之間的生物學特性與致病性差異,為了解膠孢炭疽菌的潛伏致病機理、建立監(jiān)測其侵染狀況和制
2、定有效的防治措施提供科學依據。研究結果如下:
1.采自海南省文昌果園臺農杧果的發(fā)病果實,經分離、純化、形態(tài)鑒定、致病性測定和分子鑒定,獲得一株C.gloeosporioides的野生菌株(MCGW)。
2.借助GFP標記和PEG介導轉化技術,構建杧果炭疽菌遺傳轉化體系。其關鍵條件為:實驗受體為36h的新鮮菌絲;用0.1mol/LpH5.5~6.0的磷酸緩沖液(含0.8MNaCl)配制10mg/mL的溶壁酶液;30℃,
3、80rpm酶液酶解2.5~3h。
3.經過HmB抗性鑒定、熒光顯微鏡觀察、PCR鑒定和遺傳穩(wěn)定性測定,驗證了GFP基因已成功轉入C.gloeosporioides,并能在轉化子內穩(wěn)定遺傳。獲得了GFP標記的杧果膠孢炭疽菌菌株(MCGT)。
4.系統(tǒng)比較MCGT菌株與MCGW菌株的生物學、生理學方面的特性。發(fā)現(xiàn)MCGT與MCGW在形態(tài)特征、有氧呼吸量、細胞滲透性等無顯著的差異。表明轉入GFP基因對C.gloeospor
4、ioides的生物學、生理學方面無顯著影響。用MCGT與MCGW分別對杧果的花器、幼果接種測定其致病性。杧果的花器、幼果用兩菌株接種后的發(fā)病率均在78%以上。表明MCGT與MCGW對杧果的致病性無顯著差異。
5.利用激光共聚焦顯微鏡觀察MCGT在杧果果實組織內的定殖與擴展情況。發(fā)現(xiàn)MCGT菌絲在果皮與果肉組織中均有分布;少量的菌絲在果皮細胞間隙分布,果皮組織基本保持完好狀態(tài);有大量菌絲充斥在果肉組織內,果肉組織崩潰。認為,該現(xiàn)
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