哈銳炭疽菌FSTF基因功能研究及BnWRKY75油菜轉(zhuǎn)化子防御酶的檢測.pdf

1、柿樹炭疽病是哈銳炭疽菌(Colletotrichum horii)引起的柿樹重要病害，嚴重時可對柿產(chǎn)業(yè)造成極大的經(jīng)濟損失。哈銳炭疽菌初次侵染柿樹時，會經(jīng)歷無癥狀階段（或稱活體營養(yǎng)階段）和有明顯癥狀的危害階段這兩個階段，即經(jīng)歷一定時間的活體營養(yǎng)，再殺死寄主細胞，向死體營養(yǎng)轉(zhuǎn)換。推測哈銳炭疽菌FSTF(Fungalspecific transcriptional factor)基因可能和活體營養(yǎng)相關(guān)，但尚無實驗證據(jù)。為了研究哈銳炭疽菌FST

2、F基因的功能，本文分別設(shè)計了哈銳炭疽菌FSTF基因的左臂和右臂引物，左臂引物引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位點，右臂引物引入PstⅠ和HindⅢ酶切位點，以哈銳炭疽菌基因組DNA為模板通過PCR克隆得到FSTF基因的左臂和右臂，連接于pMD19-T載體。從其它載體上克隆得到潮霉素抗性基因，通過引物引入XbaⅠ酶切位點，并連接于pMD19-T載體。將上述重組載體用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶酶切，按照左臂+潮霉素抗性基因+右臂的順序連接到pCAMB

3、IA-1300載體，構(gòu)建出哈銳炭疽菌FSTF基因的敲除載體pCAMBIA-1300-H-L-R。
　　WRKY75是植物WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員。核盤菌（Sclerotiniasclerotiorum）可侵染油菜引發(fā)油菜菌核病，對油菜危害極大。有研究發(fā)現(xiàn)油菜在受到菌核病侵染的過程中，其WRKY75（BnWRKY75）的轉(zhuǎn)錄本水平會劇烈上升，但目前對BnWRKY75在油菜抵御菌核病侵染過程中的作用仍不夠了解。本實驗室已獲得一些B