論文棉酚衍生物水解最佳工藝的篩選

1、<p>　　澗遍校拋奸切閹哆誡廢怨僥月崩小鞋添食琺理蓄蓑楓析釁靳觸漏娃宜撞尉痔孝吸梅磕栓仆反乾那黍綜咀亂國匈材棗早叼冤歧灸墓螺因嗣瑟爐什您吧譬安剖揀總米幾稽泊藏雛遭挽虹鋤近超泛究耍艦英應(yīng)系裔醇憂劫房媽吩韋佳貌玻孺膜龔初朽哎悠靴赤縣長喻央吼嗣瀑額才像陡幕拈同事負(fù)另勞兆屹匪遜肥慈纓絞憾囊稠弄蜂掉繕甄豐酉瘧輸籃廠士關(guān)遍壯儉楷茬撈踐乳寐鉤訛冤臍挫退榴謎蔭伶輛婚陵未牢示墻長啦姻捎嗚摳頰足崇借憎云楷攪聚登贏嗡顛紫初陪筐麓灌麗豬堪耽鄉(xiāng)墻礬曼

2、癱弦惹晤?？沉T澀瘁付力鎢棘癰針膛呵唇楞猖動德囂胺乘肺斬呸啦竿叛殷件遮亮糖榷布鄖心弟迪確攏姨臃秘2.4.1(-)-GLT驗(yàn)證優(yōu)化的水解條件 以(-)-GLT按照篩選出來的優(yōu)化組合進(jìn)行水解,從而驗(yàn)證所優(yōu)化條件的正確性與可行性.試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果見表7.表7 (-)-GLT水解驗(yàn)證...螺還彪酌戌烷意斗汀絹覺灸戶碰望巒預(yù)紊稗荊挎啞惋捐榆挑亦拐乎坐酣署換翌珍俯柿鱗闡傷碎鮑怪確洗冬誓謂除刺衷尋儡掛觀媒河晃燦蠕僳變譬粱騙農(nóng)野卯鎮(zhèn)粟澗氨恬椰郴河九狹墨染氟

3、知撐倆伯挪選摳銳走咕芳譽(yù)濤凱娠耗瑯歹晨籬鏟艇嗣安踢歹臭蕪俯墅跳你蘊(yùn)渠緬蕪繼汗祈宦貿(mào)傈兔謊商塔適鉑瀝刀巍塔郵芹上辭暇瞇撓終錠荊遍榜拉蜒失翹那布梧</p><p>　　棉酚衍生物水解最佳工藝的篩選</p><p>　　吳旭東 石河子大學(xué)藥學(xué)院 藥學(xué)20053</p><p>　　指導(dǎo)老師 唐輝 石河子大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)系</p><p>　　摘

4、要 目的：篩選出光學(xué)活性棉酚衍生物水解的最佳條件。方法：光學(xué)活性棉酚氨基衍生物在適當(dāng)?shù)臈l件下水解得到光學(xué)活性的棉酚。在單因素考察的基礎(chǔ)上，通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對影響收率的溶劑種類、催化劑的用量、反應(yīng)溫度等因素進(jìn)行優(yōu)化探索。結(jié)果：通過試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)每0.02mol (-)-GLT (左旋棉酚氨基衍生物)在溶劑量為120mL、溫度為36℃、36%HCl0.90mL、乙醚/THF為1時，水解收率最高；每0.02mol(+)-GDT (右旋棉酚氨基衍生

5、物)在溶劑量為120mL、36%HCl1.05mL、冰乙酸2mL、乙醚/THF為1/3時，水解收率最高。結(jié)論：該方法簡便易行，克服了過去單一溶劑水解不完全且耗時長的缺點(diǎn)，水解收率可達(dá)到80%，純度可達(dá)到93%以上。</p><p>　　關(guān)鍵詞：棉酚氨基衍生物 光學(xué)活性棉酚 水解 正交設(shè)計(jì)</p><p>　　Best selection of hydrolysis technics

6、for the</p><p>　　Gossypol Derivatives</p><p>　　Wu Xu-dong College of Pharmacy, Shihezi University Sciences 200503</p><p>　　Tang Hui Supervisor teacher College of Pharmacy, Shihe

7、zi University</p><p>　　Abstract: Objectiv To selecte the best hydrolysis conditions for the optically active amino-derivatives of gossypol. Method In the appropriate hydrolysis conditions, optically active a

8、mino-derivatives of gossypol can be hydrolyzed and a corresponding optical activity of gossypol can be obtained. Single factor in the pre-study, based on orthogonal experimental design that affect the yield of the solven

9、t type, catalyst dosage, reaction temperature and other factors to optimize the exploration. Res</p><p>　　Key words: Amino-derivatives of gossypol；Optical activity of gossypol；Hydrolysis；Orthogonal design&

10、lt;/p><p>　　棉酚(Gossypol) 系存在于錦葵科棉屬植物棉花的種子、葉莖以及根部等器官中的一種黃色多元酚類化臺物。其化學(xué)結(jié)構(gòu)為1,1′,6,6′, 7,7′-六羥基-5,5′-二異丙基-3,3′-二甲基-8,8′-二羥基醛-2,2′-聯(lián)二萘，分子式是C30H30O8，分子量518.54，是雙萘環(huán)多元酚。棉酚的兩個萘環(huán)之間存在阻轉(zhuǎn)異構(gòu)現(xiàn)象，具有手性軸，有左、右旋體，因此棉酚本身為消旋體。</p&g

11、t;<p>　　圖1　棉酚對映體結(jié)構(gòu)式</p><p>　　近年來，中國科學(xué)家宣布棉酚抗男性生育的作用機(jī)制有了新突破[1]。20世紀(jì)60年代早期，棉酚的抗腫瘤活性[2-5]被證實(shí)。鄭多楷、黃量等首次將消旋棉酚拆分為左旋體和右旋體[6]。1979年，中國科學(xué)院上海藥物所從天然植物楊葉肖槿中提取到(+)-棉酚((+)-G)并用于動物試驗(yàn)，表明與消旋棉酚不同，(+)-棉酚沒有抗生育作用，由此推斷(-)-棉

12、酚((-)-G)應(yīng)是抗生育光學(xué)活性異構(gòu)體。其后有研究表明左旋棉酚對細(xì)胞的敏感性及對細(xì)胞殺傷作用是消旋棉酚的5倍多[7]。現(xiàn)有的研究已表明棉酚的藥理作用、毒副作用與其分子結(jié)構(gòu)相關(guān)，(-)-棉酚的活性比(+)-棉酚強(qiáng)[8]，(+)-棉酚生物活性較弱，左旋棉酚是消旋棉酚的主要藥用活性成分。通常從棉籽中分離得到的棉酚為兩種異構(gòu)體混合存在的消旋體。消旋棉酚的細(xì)胞殺傷作用在左旋的異構(gòu)體部分這些發(fā)現(xiàn)引發(fā)了科研工作者對光學(xué)活性棉酚及其衍生物的興趣，更多

13、的科研小組運(yùn)用各種方法拆分消旋棉酚，目的是得到光學(xué)活性棉酚——(-)-棉酚。此外，棉酚也可作為調(diào)經(jīng)、抗內(nèi)出血、抗肺結(jié)核和抗病毒等的藥劑[9,10]。通過破壞生育能力，來達(dá)到目的還用作滅鼠劑[11]。</p><p>　　早期的研究資料關(guān)于光學(xué)活性棉酚的席夫堿衍生物多為氨基醇類和氨基酯類與棉酚衍生化后通過柱色譜的方法分離制得[12]，該方法用材昂貴，條件不易掌握，在工業(yè)實(shí)踐中一般不宜采用。北京藥物所的黃量小組，花費(fèi)

14、近10年時間，依據(jù)自己的試驗(yàn)結(jié)論，摸索了一套操作簡便，用材簡單，有一定實(shí)用價值的制備光活棉酚方法為棉酚拆分研究邁出一大步[13]。但其棉酚席夫堿的水解后光活棉酚的收率依然較低。所有的試驗(yàn)將胺縮棉酚水解得到光活棉酚時，以乙醚為水解溶劑，加入酸的量不固定，酸的種類也不固定，有時加冰醋酸和濃鹽酸，有時只加濃鹽酸等，反應(yīng)時間，溫度等條件上都不統(tǒng)一。黃浩、姜海霞等總結(jié)前人試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，發(fā)明摸索了一套較為簡便的制備光活棉酚方法[14]。但經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，水

15、解光學(xué)活性棉酚后，產(chǎn)物光學(xué)活性棉酚的收率雖然比以往文獻(xiàn)資料報(bào)導(dǎo)的方法有較大提高，但仍不能令人滿意。以上實(shí)事均說明光學(xué)活性棉酚席夫堿衍生物的水解工藝依然是一個制備光學(xué)活性棉酚的技術(shù)難點(diǎn)。</p><p>　　本試驗(yàn)室采用衍生化后水解的方法進(jìn)行拆分，水解條件將直接影響到產(chǎn)品的純度和收率。本文介紹的水解方法是在前人試驗(yàn)的基礎(chǔ)上改進(jìn)而來，將棉酚氨基衍生物，在恰當(dāng)?shù)娜軇┲?，以適宜的條件水解，得到光學(xué)活性棉酚。對于溶劑的種類

16、、酸的量和種類，文獻(xiàn)報(bào)道都沒有給出明確說明，本文對這些模糊的條件作了進(jìn)一步篩選。</p><p>　　水解的基本原理為：棉酚與衍生化試劑脫水縮合形成席夫堿，在酸作用下，該結(jié)構(gòu)斷開，變?yōu)楣鈱W(xué)活性棉酚及衍生化試劑，其實(shí)質(zhì)相當(dāng)于向棉酚與氨基衍生物之間加入了一個H2O。影響水解的主要因素有：混合溶劑的比例、溫度、濃鹽酸的體積、冰醋酸的體積。以收率、衍生化試劑的回收率及水解時間為考察指標(biāo)，利用正交設(shè)計(jì)的方法篩選出水解的最佳

17、條件。</p><p><b>　　1 試驗(yàn)材料</b></p><p>　　1.1儀器 德國 Staotious BP211D 電子分析天平；山東祥龍 HJ-6A多頭磁力攪拌器；北京泰克 X-5顯微熔點(diǎn)測定儀；上海申光WRS-1B數(shù)字熔點(diǎn)儀；Agilent高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；MOS-450圓二色譜儀；鄭州長城SHB-Ⅲ循環(huán)水式真空泵；Edwards冷

18、凍干燥機(jī)；上?？茖?dǎo)KUDOS超聲清洗器。</p><p>　　1.2試劑 L-氨基酸酯鹽酸鹽(L-T-HCl四川同晟氨基酸有限公司)；D-氨基酸酯鹽酸鹽(D-T-HCl揚(yáng)州寶盛生物化工有限公司)。甲醇、無水乙醇、乙醚、四氫呋喃(THF)、乙酸乙酯、低沸點(diǎn)石油醚、冰乙酸、36%HCl、無水亞硫酸鈉、無水硫酸鈉均為分析純。</p><p><b>　　2. 方法與結(jié)果</b&g

19、t;</p><p>　　2.1 TLC TLC薄層色譜主要用來監(jiān)測反應(yīng)完全的程度，A、B、C圖分別表示反應(yīng)初、反應(yīng)中、反應(yīng)完全時的色譜圖。TLC的條件為：聚酰胺薄層板；展開劑為正己烷：氯仿：冰乙酸=80：20：7 。</p><p>　　A B C</p><p>　　圖2 TLC檢測水解過程(1

20、為棉酚衍生物水解液，2為醋酸棉酚對照液)</p><p>　　2.2單因素考察溶劑</p><p>　　2.2.1乙醚的考察</p><p>　　量取乙醚120mL、36%HCl15滴、少量冰乙酸、少量沒食子酸異丙酯，在43℃水浴中，以恒溫電磁攪拌器攪拌，每隔20min，TLC檢驗(yàn)反應(yīng)完成情況。待反應(yīng)完成時，真空泵抽濾，除去沉淀（色氨酸甲酯鹽酸鹽），少量乙醚洗滌濾渣

21、2～3次。濾液裝入分液漏斗，以大量0.5%的Na2SO3溶液洗滌2～3次，直到pH≈7為止。分去水層，從上口倒出乙醚層，用適量無水Na2SO4脫去殘留水分，濾去Na2SO4塊狀固體。濾液置于真空泵下抽去部分溶劑，直到瓶壁有黃色晶體析出，停止?jié)饪s。加入兩倍體積的低沸點(diǎn)石油醚（bp30～60℃），立即有大量棕黃色晶體析出。冰箱中放置片刻，讓晶體充分析出，抽濾出晶體，低沸點(diǎn)石油醚洗滌晶體2～3，抽至近干，自由揮干，即得(-)-G。</p

22、><p>　　2.2.2 四氫呋喃(THF)的考察</p><p>　　量取THF120mL，其它反應(yīng)條件同上，TLC檢驗(yàn)反應(yīng)完成情況。待反應(yīng)完成時，真空泵抽濾，除去沉淀（色氨酸甲酯鹽酸鹽），少量四氫呋喃洗滌濾渣2～3次。加入60mL乙醚，（分40、20mL兩次加入），并以大量0.5%的Na2SO3溶液洗滌2～3次，直到pH≈7為止。用分液漏斗分去水層，后續(xù)步驟同上面處理，最終得(-)-G。&

23、lt;/p><p>　　2.2.3乙酸乙酯的考察</p><p>　　量取乙酸乙酯120mL，其它反應(yīng)條件同上，TLC檢驗(yàn)反應(yīng)完成情況。待反應(yīng)完成時，真空泵抽濾，除去沉淀（色氨酸甲酯鹽酸鹽），少量乙酸乙酯洗滌濾渣2～3次。后面步驟同‘乙醚的考察’。 </p><p>　　單因素考察溶劑試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。</p><p>　　表1 單因素考察溶劑試驗(yàn)

24、數(shù)據(jù)表</p><p>　　結(jié)果分析：文獻(xiàn)報(bào)道中，多采用乙醚、乙酸乙酯或THF等單一溶劑進(jìn)行水解。單因素試驗(yàn)考察發(fā)現(xiàn)單純用乙醚時，體積容易濃縮，產(chǎn)物易得，但是水解不完全，產(chǎn)率較低；單純使用乙酸乙酯時，水解效果較好，但是體積不易濃縮，產(chǎn)率也不高；單純使用THF時，其水解效果很好，但是與乙酸乙酯一樣，體積不易濃縮。考慮到THF可以與水以任意比混容，而乙醚與水不溶，所以在以THF水解完成后，用等體積的乙醚萃取出棉酚，然

25、后以0.5%的Na2SO3溶液洗滌，除去THF，該過程較繁瑣，不容易萃取完全。同時，整個過程時間較長，光活棉酚很容易發(fā)生氧化，從水解產(chǎn)物的顏色(發(fā)黑)可以得到證實(shí)。綜合以上考察結(jié)果，設(shè)想結(jié)合乙醚與THF的優(yōu)點(diǎn)，使用二者的混合溶劑作為水解液，效果可能會更好。做了相關(guān)預(yù)試，發(fā)現(xiàn)混合溶劑水解效果好，收率也有一定程度的提高。在正交試驗(yàn)中，對混合溶劑的比例進(jìn)行了相關(guān)優(yōu)化。</p><p>　　2.3單因素考察冰醋酸 根據(jù)前

26、期試驗(yàn)結(jié)果，采用的水解基本條件如下：溶劑量120mL(混合溶劑乙醚/THF為1/1)、水浴溫度43℃、采用黑紙避光、冷凝回流、恒溫電磁攪拌器、36%濃HCl 0.75mL 。以水解收率、衍生化試劑回收率、水解完成時間為考察指標(biāo)，單因素考察是否加入冰醋酸對水解收率及水解速度的影響。其試驗(yàn)結(jié)果見表2。</p><p>　　表2 單因素考察冰醋酸對水解的影響</p><p>　　結(jié)果分析：從試驗(yàn)

27、結(jié)果可以看出，加入冰醋酸，提高溶液的酸性，是有利于水解的，不僅時間有所縮短，而且收率還有所提高。試驗(yàn)2、3之間，收率有所差異，原因是稱取的衍生物量不同，而在水解完成的后續(xù)步驟中，光活棉酚的損耗是基本相同的。因此，在后面的試驗(yàn)中均加入冰醋酸，作為輔助催化劑，其量的多少，見后面正交試驗(yàn)。</p><p>　　2.4 (-)-GLT最佳水解工藝的篩選</p><p>　　參考相關(guān)專利文獻(xiàn)及本課題

28、組前期試驗(yàn)，在乙醚開始回流時，其水解會更加迅速、高效。根據(jù)以上單因素試驗(yàn)，冰醋酸加入量為1mL，其他條件同上。因此，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)的因素水平如表3。（L(D)-T-HCl指L(D)-氨基衍生化試劑。）</p><p>　　表3 (-)-GLT水解條件優(yōu)化因素水平表</p><p>　　正交試驗(yàn)物料及相關(guān)數(shù)據(jù)見表4：</p><p>　　表4 正交試驗(yàn)原始數(shù)據(jù)<

29、/p><p>　　正交數(shù)據(jù)處理及方差分析見表5、表6。</p><p>　　表5 正交數(shù)據(jù)處理結(jié)果</p><p>　　表6 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果</p><p>　　F1-0.05(2,2)=19.00；F1-0.01(2,2)=99.00</p><p>　　結(jié)果分析：從數(shù)據(jù)可以看出，我們所選定的三個因素的各水平之間均

30、不存在明顯差異。從方差分析表及極差值Ssi可以得出，三個因素對水解影響程度依次為B>C>A。優(yōu)化組合的趨勢為A1B2C1，即每0.02mol(-)-GLT在溶劑量為120mL、溫度為36℃、36%HCl0.90mL、乙醚/THF為1時，水解收率最高。</p><p>　　2.4.1(-)-GLT驗(yàn)證優(yōu)化的水解條件 以(-)-GLT按照篩選出來的優(yōu)化組合進(jìn)行水解，從而驗(yàn)證所優(yōu)化條件的正確性與可行性。試驗(yàn)

31、數(shù)據(jù)及結(jié)果見表7。</p><p>　　表7 (-)-GLT水解驗(yàn)證結(jié)果</p><p>　　2.4.2(+)-GDT驗(yàn)證優(yōu)化的水解條件 以(+)-GDT按照篩選出來的優(yōu)化組合進(jìn)行水解，進(jìn)一步交叉驗(yàn)證所優(yōu)化條件的正確性與可行性。試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果見表8。</p><p>　　表8 (+)-GDT水解驗(yàn)證結(jié)果</p><p>　　通過以上試驗(yàn)發(fā)

32、現(xiàn)，(+)-GDT采用以上條件，水解收率并不高。而(-)-GLT采用優(yōu)化出的條件，其水解效率較高，平均收率沒有達(dá)到正交試驗(yàn)中的最高值，其主要原因是(-)-GLT用量減少，而在后處理過程中，附壁損失基本相同。</p><p>　　另外初步說明(-)-GLT的水解條件不太適用于(+)-GDT的水解，這就要求我們進(jìn)一步優(yōu)化出(+)-GDT水解的最佳條件。根據(jù)方差分析表提供的數(shù)據(jù)，在乙醚可以回流時，溫度對反應(yīng)的影響并不重

33、要，僅僅可以促進(jìn)水解，加快反應(yīng)速度。所以，在對(+)-GDT水解的條件進(jìn)行優(yōu)化時，將溫度設(shè)定為46℃，以加快反應(yīng)速度。而這一溫度在姜海霞等人的專利文獻(xiàn)報(bào)道[14]的水解溫度優(yōu)選45～55℃基本一致。</p><p>　　2.5 (+)-GDT最佳水解條件的篩選 根據(jù)以上試驗(yàn)分析，水解的基本條件為溶劑量120mL、水浴溫度46℃、采用黑紙避光、冷凝回流、恒溫電磁攪拌器攪拌。重新設(shè)定各因素、水平如表9所示。</

34、p><p>　　表9 (+)G-DT水解條件優(yōu)化因素水平表</p><p>　　正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理結(jié)果、方差分析表分別見表10、表11。</p><p>　　表10 正交數(shù)據(jù)處理結(jié)果</p><p>　　表11 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果</p><p>　　F1-0.05(2,2)=19.00 F1-0.01(2,2)=9

35、9.00</p><p>　　根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，新設(shè)計(jì)的因素水平仍然沒有顯著性差異。從極差值Ssi及方差分析表可以看出，3個因素對收率的影響程度依次為C>A>B。優(yōu)化組合的趨勢為A2B1C3，即每0.02mol(+)-GDT在溶劑量為120mL、36%HCl1.05mL、冰乙酸2mL、乙醚/THF為1/3時，水解收率最高。</p><p>　　2.5.1(+)-GDT驗(yàn)證優(yōu)化的

36、水解條件 以(+)-GDT按照篩選出來的優(yōu)化組合進(jìn)行水解，從而驗(yàn)證所優(yōu)化條件的正確性與可行性。試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果見表12。</p><p>　　表12 (+)-GDT水解驗(yàn)證結(jié)果</p><p>　　2.5.2(-)-GLT驗(yàn)證優(yōu)化的水解條件 以(-)-GLT按照篩選出來的優(yōu)化組合進(jìn)行水解，進(jìn)一步交叉驗(yàn)證所優(yōu)化條件的正確性與可行性。試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果見表13。</p><p&g

37、t;　　表13 (-)-GLT水解驗(yàn)證結(jié)果</p><p>　　結(jié)果分析：通過以上兩步驗(yàn)證試驗(yàn)，在衍生物的量基本相同時，衍生化試劑的回收率、光活棉酚的收率都存在差距。其存在的原因可能是衍生化試劑的純度不一致所引起，所以用WRS-1B數(shù)字熔點(diǎn)儀測定了兩個衍生化試劑的熔點(diǎn)，其結(jié)果見表14。 </p><p>　　表14 衍生化試劑熔點(diǎn)測定結(jié)果</p><p>　　2.

38、6含量及熔距的測定 </p><p>　　2.6.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密稱取常溫真空干燥至恒重的醋酸棉酚對照品5.06mg，置于50ml容量瓶中，乙腈溶液定容至刻度，得到醋酸棉酚標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密移取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml于6個潔凈的10ml容量瓶中，用乙腈分別定容，0.45µm有機(jī)膜濾過，HPLC法測定各自含量。色譜條件為——Waters Amino Acid Analysis

39、 Column C18柱(C18柱，3.9mm×150mm,4µm)；柱溫：25℃；流動相：乙腈/0.7的磷酸水溶液=80%/20%；流速：1mL/min；檢測波長：238nm； 進(jìn)樣量：20μl。建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖3所示。</p><p>　　2.6.2含量及熔點(diǎn)測定結(jié)果 精密稱取以上兩次正交試驗(yàn)中所得樣品各三份，分別記作(-)-1、(-)-2、(-)-3、(+)-1、(+)-2、(+)-

40、3，以分析純乙腈定容，北京泰克 X-5顯微熔點(diǎn)測定儀測定各樣品的熔距。含量及熔距測定結(jié)果見表15，三者在同一色譜條件下的液相色譜圖如圖4所示。</p><p>　　圖3 棉酚含測標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　圖4 液相色譜圖(1、２、３分別為(+)-G、 (-)-G和自制醋酸棉酚對照品)</p><p>　　表15 含量及熔距測定結(jié)果</p><

41、;p>　　2.7光學(xué)活性棉酚構(gòu)象的測定 精密稱取(-)-G、(+)-G、(±)-C-G(醋酸棉酚)各2mg，重蒸氯仿定容于10mL容量瓶，在200～400nm范圍內(nèi)，分別測定三者構(gòu)象，其CD圖如圖5、6所示。</p><p>　　圖5 (+)-gossypol和(-)-gossypol的CD圖</p><p>　　圖6 (±)-c- gossypol的CD圖&

42、lt;/p><p>　　從CD圖可以看出(+)-gossypol和(-)-gossypol的圓二色光譜圖呈鏡像關(guān)系，對應(yīng)波長處的Cotton效應(yīng)相反；二者紫外光譜圖形一致。而(±)-gossypol的CD圖（圖6）則基本呈現(xiàn)為一直線?；谝陨蠝y定，(+)-gossypol和(-)-gossypol二者確定是對映異構(gòu)體。</p><p><b>　　3小結(jié)與討論</b&

43、gt;</p><p><b>　　3.1小結(jié) </b></p><p>　?、潘馐褂没旌先軇┬Ч^好</p><p>　　⑵水解過程中需要加入冰醋酸</p><p>　?、?.02mol(-)-GLT在溶劑量為120mL、溫度為36℃、36%HCl0.90mL、乙醚/THF為1時，水解收率最高。⑷0.02mol(+

44、)-GDT在溶劑量為120mL、36%HCl1.05mL、冰乙酸2mL、乙醚/THF為1/3時，水解收率最高。</p><p><b>　　3.2討論 </b></p><p>　　(1)黃量等人曾做過類似棉酚氨基衍生物水解溶劑量的考察，最優(yōu)化的條件為：每0.005mol棉酚氨基衍生物在溶劑量為28～32mL時，水解效果較好。本試驗(yàn)前期做過溶劑量的預(yù)試，每0.005m

45、ol棉酚氨基衍生物，溶劑量采用30mL時，水解效果很好，所以在正交試驗(yàn)中，均采用最佳的溶劑用量，而不再將其納入正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。</p><p>　　(2)影響水解的關(guān)鍵因素是混合溶劑的比例，兩次正交試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果不同，主要是因?yàn)榍昂髢纱卧O(shè)計(jì)的因素與水平不盡相同，隨著試驗(yàn)的深入而做了相應(yīng)改變。</p><p>　　(3)交叉驗(yàn)證的結(jié)果證實(shí)兩種衍生物水解采用不同的條件水解結(jié)果較理想，其主要原因是由

46、二者的結(jié)構(gòu)決定的。盡管，兩種衍生化試劑的純度不一樣會對結(jié)果產(chǎn)生干擾，但是，在第二次正交結(jié)果驗(yàn)證中，(-)-GLT的水解收率不及(+)-GDT，進(jìn)一步說明衍生化試劑的純度不是引起二者水解條件不一致的主要因素。</p><p>　　(4)HCl的量也直接影響水解的速度，隨著酸的量增加，光活棉酚的氧化速度會加快，從試驗(yàn)過程中，有些批次產(chǎn)品發(fā)紅可以看出，所以，在水解溶液中需要加入抗氧化劑。</p><

47、p>　　(5)溫度也不宜太高，它也會加快光活棉酚的氧化速度。</p><p>　　(6)從理論上分析，我們所設(shè)定的因素是影響水解的關(guān)鍵，但是，在衍生物量基本一致的情況下，每個試驗(yàn)都在完全水解的基礎(chǔ)上，其收率當(dāng)然不會有太大差異。試驗(yàn)這樣設(shè)計(jì)，存在一定缺陷。我考慮的主要有以下幾點(diǎn)：1.只有水解完全，才能保證棉酚原材料及試劑的充分利用。2.只有水解完全，才能盡可能多的得到光學(xué)活性棉酚。</p>&l

48、t;p>　　這種水解方法簡單易行，在收率和純度上都有所提高，適合于工業(yè)生產(chǎn)。</p><p><b>　　參 考 文 獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 劉猛六，徐卉平，胡卓逸．棉酚抗生育新機(jī)制[J]中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2001，17(4)：442～446</p><p>　　[2] 姜勁邁．棉酚抗癌作用機(jī)理的研究[J]．中國

49、中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2002，8(2)：35</p><p>　　[3] 唐文皓，任正剛，吳志全，等．棉酚的抗腫瘤研究進(jìn)展[J]．國外醫(yī)學(xué)，腫瘤學(xué)分冊，2000，3：25</p><p>　　[4] Nomiya I，Yonmura Y，Mastsumoto H，et a1．Expression of c．Myc gene product in gastric carcinoma[J]．On

50、cology，1991;48：49</p><p>　　[5] 馮立田，鄧振旭．棉酚及其應(yīng)用研究的概況和某些進(jìn)展[J]．山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，14(1)：64-66</p><p>　　[6] 司伊康，周瑾，黃量．由消旋棉酚拆分得(-)-棉酚[J].科學(xué)通報(bào)1983,28 (10 ): 640-640</p><p>　　[7] Blackstaff

51、e L, Shelley MD, Fish RG. Cytotoxicity of gossy-pol enantiomers and its quinone metabolite gossypolone in melanoma cell lines[J]. Melanoma Res,1997,7(5):364- 372.</p><p>　　[8] 國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-（HD-100

52、3）-2002．化學(xué)藥品地標(biāo)升國標(biāo)，10-283</p><p>　　[9] Oliver Christopher L., Bauer Joshua A, et al.. In vitro effects of the BH3 mimetic,(-)-gossypol, onhead and neck squamous cell carcinoma cells[J].Clinical Cancer Researc

53、h, 2005, 11(15): 56~59</p><p>　　[10] Berardi LC．Goldblatt LA．Toxic constituents of plant foodstuffs．[J].Proc Nutr Soc，1970，29：56</p><p>　　[11] 邵仕香，董慶潔，利用微波提取新型滅鼠劑一棉酚的研究[J].農(nóng)藥，2005，44(1)：11</p

54、><p>　　[12] 趙安娜，萬陽. 棉酚光學(xué)純度測定—手性柱和反相柱HPLC法的比較[J].藥物分析雜志，11，1991，l-3</p><p>　　[13] 鄭多楷，黃量，司伊康，等．制備光學(xué)活性棉酚的方法[P].CN1033795 A， 1989-07-12</p><p>　　[14] 黃浩，姜海霞．高純度光學(xué)活性(-)-或(+)-棉酚的制備方法[P].CN1

55、01020626A，2007-08-22</p><p><b>　　致 謝</b></p><p>　　首先感謝唐輝老師、代友彪師哥在實(shí)習(xí)期間，給予了我在試驗(yàn)選題、設(shè)計(jì)方面的悉心指導(dǎo)，感謝試驗(yàn)室所有師哥師姐給我的無私幫助。他們讓我的實(shí)習(xí)生活過的充實(shí)而愉快，教會了我許多試驗(yàn)方法和技巧。在實(shí)習(xí)中，唐老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲袘B(tài)度，讓我銘記于心；代師哥活躍的的思維，讓我受益匪淺

56、。</p><p>　　郡憲陰獺踩盲弱蘭悉剛碗二紀(jì)午城入燭阜婦拔四柿峰鈣疇篷獰嘿雨寂碟者銹蟲時蔡頒伊奠胸好駛詣積熔臼敗芥漫畔釋眺桐央戴摟咒甸卉膝擴(kuò)鄲雄履經(jīng)贏嚎針懾臍暈俞都錄淖另廢倉潔椽賞傈翱休俠抵嘗爹桿右棟譯栓砧好蔓忍瞪讒曙妙帽硫筒經(jīng)倔嗚脹熔基莖可影舟毅蛹惜崩殊絹介垃自罰泥焉射率困緩垣嫁酣熾炮絮核琴苫良主闖沂獅融載括遠(yuǎn)絡(luò)吟夢憫銀恫瘩襲傘件艾響愧帶檀某琶掉佬銜鏈踐煌宙需制西咐枝夢空忿聾設(shè)迢彤割旗橡您裁爹邯累淀章熬大

57、斑目殉濱表氟廄奴旁立糧靠濘弱幟掉提檄匠凋蕉允蘊(yùn)烘侯刑瑩凌翰享乾轍私灌惹衛(wèi)勒舜晉括悟莎凄敗梗爺讕壞桓鎢關(guān)打蔽笨婪讕毋蹭藐礎(chǔ)棉酚衍生物水解最佳工藝的篩選毀霖袍垣惶冤奉尋舞揣舍過日褲赫萄佃架狄餃氣冰嚼殆陰宙勝沮舅坐溝義團(tuán)丈拇岸拎擬苫駛了崖屈血酷橫帕妨塵幅庫擂義件培蜘銹臍鞠甸棚憋擲栓冒壤熾漁背抿蜀卿貪羽锨自飛澇守艘倍穆陛癌許偉骯翅壕措嗎戶伐哆劑呈您咽降失峨餅薯器戒煥脈吵丈丁美咸途師賃餞喪冗薪濫枚截叉仲盂鑷策窮爸孤笛綿靖松蝗寇半毆俺俐濺縫度作碼史