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文檔簡介
1、FAK、AKT、TSC2是參與細(xì)胞信號通路的重要蛋白。盡管FAK、AKT、TSC2在人及模式生物中得到了廣泛研究,但對山羊FAK、AKT、TSC2的研究較少。對FAK、AKT、TSC2的基因和編碼蛋白的研究不僅可以區(qū)別物種間的遺傳差異和進(jìn)化特征,而且對動物細(xì)胞生長及個體發(fā)育過程的研究具有重要意義。
本研究首先利用RT-PCR技術(shù)克隆絨山羊FAK、TSC2和AKT基因cDNA的全長CDS,分析其組織特異性表達(dá)模式。再利用酵母
2、雙雜交的方法鑒定FAK與TSC2,FAK與AKT的相互作用關(guān)系,再以FAK作為誘餌蛋白利用免疫共沉淀和Western-Blot檢測TSC2的存在。
結(jié)果表明,內(nèi)蒙古白絨山羊FAK基因cDNA全長3159bp,編碼1052個氨基酸；TSC2基因cDNA全長5184bp,編碼1727個氨基酸(HQ684023.1);AKT基因cDNA全長1443bp,編碼480個氨基酸(HM130679)。
根據(jù)基因克隆結(jié)果,本
3、研究構(gòu)建了酵母雙雜交誘餌表達(dá)載體pGBKT7-AKT、pGBKT7-FAK1、pGBKT7-FAK2、pGBKT7-FAK3、pGBKT7-TSC2和靶載體pGADT7-AKT、pGADT7-TSC2。酵母雙雜交結(jié)果顯示,FAK可與TSC2、AKT蛋白發(fā)生直接相互作用。FAK與AKT的作用發(fā)生在FAK的649-1076aa(C-末端側(cè)翼結(jié)構(gòu)域)區(qū)域和AKT的1-474aa區(qū)域；FAK與TSC2的作用發(fā)生在FAK的649-1076aa(C
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