紹興鴨熱休克基因研究以及對細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、熱休克蛋白作為分子伴侶，參與維持細(xì)胞蛋白質(zhì)空間構(gòu)象，促進(jìn)變性蛋白質(zhì)修復(fù)，增加細(xì)胞抵抗力。本試驗(yàn)選取紹興鴨HSP60、HSP70、HSP90基因進(jìn)行cDNA序列克隆，用熒光定量方法檢測HSP基因在不同組織中、不同熱應(yīng)激狀態(tài)下的表達(dá)情況，運(yùn)用RNAi方法研究HSP基因在肝細(xì)胞中對細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的調(diào)控作用，運(yùn)用iTRAQ分析熱應(yīng)激對肝臟差異蛋白表達(dá)的影響。主要結(jié)果如下:
　　1) HSP60 cDNA序列全長2027bp(GenBan

2、k accession number: JQ669386)，其中包括58 bp的5'UTR、262 bp的3'UTR和1707bp的編碼區(qū)(CDS)，翻譯編碼569個(gè)氨基酸。HSP60氨基酸序列與紅色原雞同源性為93.1％，與火雞同源性為92.6％、與斑馬雀同源性為90.9％;紹興鴨HSP70基因cDNA序列全長1532bp，包括68 bp的5'UTR、339 bp的3'UTR和1125bp的編碼區(qū)(CDS)，翻譯編碼375個(gè)氨基酸。H

3、SP70氨基酸序列與火雞同源性為99.5％、與紅色原雞同源性為99.4％，與珍珠雞和鵪鶉同源性為99.2％;紹興鴨HSP90基因cDNA序列全長為1350 bp，包含251bp5-UTR、214bp3-UTR與1086bp CDS，編碼362個(gè)氨基酸。HSP90氨基酸序列與斑胸草雀、紅色原雞、火雞同源性均達(dá)到100％、與日本鵪鶉同源性為99.7％。
　　2) HSP60、HSP70和HSP90基因在整個(gè)紹興鴨孵化期均低水平mRNA

4、表達(dá);正常情況下，紹興鴨HSP60 mRNA在肝臟表達(dá)量最高，HSP70和HSP90mRNA在心臟中表達(dá)量最高;持續(xù)性熱應(yīng)激時(shí)，HSP60 mRNA在心臟、肝臟、腎臟、脾臟與胰腺5種組織中的表達(dá)量增加，HSP70 mRNA在心臟、肝臟、腎臟、脾臟4種組織中的表達(dá)量增加，HSP90mRNA在心臟、肝臟中表達(dá)量增加;急性熱應(yīng)激時(shí)，HSP60、HSP70mRNA在心臟、肝臟2種組織中表達(dá)量升高，HSP90 mRNA在心臟、肝臟、腎臟3種組織中

5、表達(dá)水平升高;心臟HSP60 mRNA熱應(yīng)激恢復(fù)2小時(shí)后表達(dá)量降至正常水平，心臟和肝臟HSP70 mRNA表達(dá)熱應(yīng)激恢復(fù)2小時(shí)降至正常水平，心臟和肝臟HSP90 mRNA熱應(yīng)激恢復(fù)3小時(shí)后降至正常水平。
　　3)用RNAi方法對鴨肝細(xì)胞HSP基因表達(dá)進(jìn)行干涉，發(fā)現(xiàn)HSP60mRNA表達(dá)量降低了75.69％，同時(shí)CCO基因表達(dá)量升高704.7％、SAPK基因升高4325％、PKB基因降低95.9％;HSP70表達(dá)量降低了80.0％，

6、CCO基因表達(dá)量升高1133.2％、TRAIL基因表達(dá)量升高146.2％、SAPK基因表達(dá)量升高82.4％、PKB基因表達(dá)量降低98.4％; HSP90表達(dá)量降低了80.0％，CCO基因表達(dá)量升高892.6％、SAPK基因表達(dá)量升高3502.1％、PKB基因降低97.8％。
　　4) iTRAQ鑒定出98個(gè)熱應(yīng)激表達(dá)差異蛋白，其中57個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，41個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。GO注釋和Pathway富集分析表明這些蛋白主要是與糖酵解和糖