家蠶bmo-miR-7靶基因yan的鑒定.pdf

1、miR-7和yan基因調(diào)控果蠅光感受器的分化和復(fù)眼的發(fā)育，它們相互負(fù)調(diào)控形成一個(gè)調(diào)控回路，保證果蠅復(fù)眼的正常發(fā)育。
　　 家蠶作為經(jīng)典遺傳學(xué)研究的模式生物之一，在復(fù)眼的發(fā)育中，是否存在和果蠅復(fù)眼發(fā)育一樣的調(diào)控模式?要回答這一問(wèn)題，就要先證明家蠶miR-7在yan基因上的識(shí)別位點(diǎn)。所以，本文對(duì)bmo-miR-7的靶基因Bmyan進(jìn)行了初步研究。獲得的主要研究結(jié)果如下：
　　 1、家蠶Bmyan基因的克隆和表達(dá)。
　　

2、 Bmyan基因長(zhǎng)為1431bp，編碼477個(gè)氨基酸，由4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成。其蛋白含有SAM-PNT蛋白結(jié)構(gòu)域和ETS蛋白結(jié)構(gòu)域。在動(dòng)物中，SAM-PNT蛋白結(jié)構(gòu)域在信號(hào)傳導(dǎo)中是廣泛分布的一種結(jié)構(gòu)域；ETS蛋白結(jié)構(gòu)域是一種轉(zhuǎn)錄因子，其蛋白分子結(jié)合在基因組特異的DNA序列上，誘導(dǎo)或者抑制基因轉(zhuǎn)錄，其結(jié)構(gòu)包含三個(gè)α-螺旋和四股β-層，組成一個(gè)螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)，第三個(gè)α-螺旋負(fù)責(zé)與DNA的大溝結(jié)合。
　　 同源性分析結(jié)果

3、表明，yan高度保守。
　　 基于RT-PCR檢測(cè)，Bmyan在5齡3天的家蠶頭部、卵巢中高量表達(dá)，體壁、中腸中次之，精巢和血液中微量表達(dá)，在其余組織中未檢測(cè)到表達(dá)信號(hào)。在幼蟲(chóng)期，Bmyan表達(dá)水平相對(duì)較低，也沒(méi)有大的波動(dòng)，但在蛹期卻高量表達(dá)。
　　 2、家蠶Bmyan基因3'UTR的克隆與序列分析
　　 克隆了Bmyan基因的3端非翻譯區(qū)(3'UTR)。
　　 Bmyan基因的3'UTR長(zhǎng)568bp，與

4、Bmyan基因拼接后總長(zhǎng)為1999bp。經(jīng)RNAhybrid(http：//bibiserv.techfak.uni-bielefeld.de/rnahybrid/)在線軟件預(yù)測(cè)，該基因全長(zhǎng)序列的1529-1546位點(diǎn)上有bmo-miR-7的一個(gè)靶位點(diǎn)。
　　 3、熒光素酶報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染bmo-miR-7 mimics驗(yàn)證靶基因
　　 構(gòu)建含有Bmyan基因3'UTR和熒光素酶報(bào)告基因的轉(zhuǎn)染載體，將該載體與bmo-miR