辣椒遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建及其在CabZip2、CaLRR、CaP等候選基因RNAi載體遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用.pdf

1、辣椒（Capsicum annuum L）是我國(guó)乃至全世界廣泛栽培、十分重要的一種茄科蔬菜，其遺傳改良是生產(chǎn)中確保產(chǎn)量、品質(zhì)和效益的重要基礎(chǔ)。但是，常規(guī)的辣椒育種周期長(zhǎng)、效率低，且容易導(dǎo)致栽培品種或組合遺傳背景日趨狹窄，難以滿足需要．而現(xiàn)代基因工程由于其可實(shí)現(xiàn)跨物種的基因交流，可實(shí)現(xiàn)作物性狀的定向遺傳改良而受到人們的高度重視，基因工程與常規(guī)育種的有機(jī)結(jié)合被認(rèn)為是現(xiàn)代育種的有效手段．遺傳轉(zhuǎn)化體系是實(shí)現(xiàn)基因工程的重要基礎(chǔ)，同時(shí)也是植物功能基

2、因組學(xué)研究的重要手段。但是，當(dāng)前辣椒轉(zhuǎn)基因體系還不完善，效率不高且存在明顯的基因型依賴性．本文研究建立了辣椒離體培養(yǎng)再生體系和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系，應(yīng)用該體系進(jìn)行了幾個(gè)載體的遺傳轉(zhuǎn)化。主要結(jié)果如下： 1、辣椒離體再生體系的建立：14d左右的苗齡辣椒無(wú)菌苗的子葉和莖尖是組織培養(yǎng)的最佳外植體；建立以辣椒子葉和莖尖為外植體的叢生芽直接誘導(dǎo)體系，在分化培養(yǎng)基中，添加BA和NAA有利于叢生芽的誘導(dǎo)，但NAA過(guò)高則易產(chǎn)生根。添加OD600值為1．

3、1的PJ4ml/L的有利于辣椒的分化．本研究中最適合的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+ BA5mg/L+ NAA0．1mg/L+ AgNO34mg/L+ PJ4ml/L；不同基因型辣椒子葉和莖尖的叢生芽誘導(dǎo)率有顯著差異；0．5mg/L GA3有利于辣椒叢生芽的伸長(zhǎng)，高于此濃度易產(chǎn)生畸形芽；通過(guò)篩選確定最佳辣椒生根培養(yǎng)基為：1/2 MS+ NAA0．1mg/L+ IAA0．1mg/L； 2、辣椒遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及應(yīng)用：辣椒遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)表明：辣

4、椒的卡那霉素致死濃度可以達(dá)到70mg/L；辣椒子葉遺傳轉(zhuǎn)化的最佳條件：辣椒子葉必須預(yù)培養(yǎng)2d左右，用含有AS濃度200μmol/L的OD600值約0．6的菌液濃度浸泡8min，共培養(yǎng)2d后進(jìn)行洗菌，篩選培養(yǎng)；通過(guò)對(duì)比確定辣椒轉(zhuǎn)化體系中生根培養(yǎng)基中應(yīng)添加頭孢霉素來(lái)抑制農(nóng)桿菌生長(zhǎng)．應(yīng)用所構(gòu)建的辣椒離體再生和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系，對(duì)CabZip2、CaLRR、CaP等幾個(gè)RNAi載體進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，其中CabZip2載體獲得了8個(gè)轉(zhuǎn)化克隆