四艾滋病梅毒丙肝檢測及結(jié)果意義教程

1、艾滋病梅毒丙肝實驗室檢測及影響結(jié)果因素分析,內(nèi)容提要：,1.艾滋病檢測程序、方法應(yīng)用和注意事項。2.梅毒檢測程序、方法應(yīng)用和注意事項。3.丙肝檢測程序、方法應(yīng)用和注意事項。4.影響實驗室檢測結(jié)果的因素分析,艾滋病檢測方法,常用HIV病原學(xué)檢測方法: 1. 核酸檢測（ PCR、病毒載量） 2. 病毒培養(yǎng)分離 3. P24抗原檢測常用HIV抗體檢測方法: 初篩：1.酶聯(lián)免疫吸附法 ELI

2、SA：第三代、第四代 2.快速檢測 RT：金標、硒標 3.簡單法 PA: 明膠顆粒凝集 確證：免疫印跡法 WB:（Western Blot）、RIBA其他相關(guān)檢測方法: 免疫功能測定：CD4/CD8檢測,HIV抗體檢測目的,1 HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。2 以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需

3、要進行的體檢等。3 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。4 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群。,1 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。2 嚴格遵守實驗室SOP。3 篩查試驗陽性，須作確證試驗。4 篩查試驗陰性， 不應(yīng)做確證試驗。5 篩查及確證試驗陽性均應(yīng)做好咨詢工作。,HIV抗體檢測的要點,HIV抗體篩查檢測

4、流程,初篩試驗,1、HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復(fù)檢）和確證試驗。 2、根據(jù)檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進行初篩檢測，對呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，需要進一步做復(fù)檢試驗和確證試驗。,復(fù)檢試驗,對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行復(fù)檢試驗。 如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑

5、，則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。 如兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性（-）；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確證實驗室進行確證試驗。 如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測呈陽性反應(yīng)，而抗體試劑檢測為陰性反應(yīng)，則應(yīng)考慮進行HIV-1 p24抗原或核酸檢測，必要時進行隨訪。,確證試驗,1 確證試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內(nèi)的試劑。2 確證樣品可采用血清、血漿

6、、濾紙干血斑樣品。3 確證方法包括免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）等。,HIV抗體不確定（±）,結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在4周后隨訪檢測，如帶型沒有進展或呈陰性反應(yīng)，則報告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則報告陽性；如隨訪期間帶型有進展，但不滿足陽性標準，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周。如帶型沒有進展或呈陰性反應(yīng)則報告陰性；滿足HIV抗體陽性診斷標準則報告陽性，不滿足陽性判斷標準可視情

7、況決定是否繼續(xù)隨訪。 隨訪期間可根據(jù)需要，檢測病毒核酸或P24抗原作為輔助診斷。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，根據(jù)實際情況需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確證試驗或HIV-2核酸檢測，以進一步明確HIV-2感染狀態(tài)，疑難樣品送國家艾滋病參比實驗室進一步分析。,HIV-2抗體陽性,出現(xiàn)HIV-2型特異性指示帶的樣品：如果同時呈HIV-1抗體陽性反應(yīng)，報告HIV-1抗體陽性，不推薦進一步做HIV-

8、2抗體確證試驗；如果同時呈HIV-1抗體不確定或陰性反應(yīng)，需用HIV-2型確證試劑再做HIV-2的抗體確證試驗。同時符合以下二條標準，即出現(xiàn)至少2條env帶（gp36和gp140/ gp105），和試劑盒提供的陽性判定標準，可判為HIV-2抗體陽性。,孕產(chǎn)婦新生兒檢測,艾滋病快速檢測試驗（RT）,是在ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種檢測技術(shù)，它用膠體金或硒標記抗原、抗體后以層析方法進行檢測。突出優(yōu)點為快速、試劑便于保存、檢測不需要特殊

9、設(shè)備并可以單份檢測 ，比較適用于基層醫(yī)療單位和標本初篩。挑戰(zhàn)：進一步提高檢測靈敏度和特異性，實現(xiàn)檢測多元化，進行定量和半定量檢測膠體金紙條將會更加廣泛地應(yīng)用于各個領(lǐng)域。,,,,快速試劑使用中存在的問題,快速檢測只是初篩檢測，存在較高的假陽性率和假陰性率；技術(shù)上屬于主觀判讀，不具備標準化條件；快速檢測的質(zhì)量控制問題目前沒有有效方法；價格是常規(guī)技術(shù)的5倍。行政經(jīng)費政策不支持，個人支付價位高；存在較大的批間誤差，加上不屬于政策規(guī)定項

10、目，風(fēng)險較大，基層醫(yī)療衛(wèi)生單位不愿意承擔(dān)責(zé)任。擔(dān)心敏感性不夠高，不敢出陰性報告；,HIV-1抗原檢測的用途：,1 HIV-1感染窗口期、HIV抗體不確定或HIV-1陽性母親所生嬰兒的鑒別診斷。2 第四代HIV檢測試劑的陽性結(jié)果的輔助診斷。3 監(jiān)測病程進展或抗病毒治療效果。4 HIV分離培養(yǎng)，病毒復(fù)制狀況的監(jiān)測。,HIV-1抗原檢測方法和結(jié)果報告,方法：ELISA，有定量檢測。結(jié)果報告和解釋： HIV-1 P

11、24抗原篩選試驗有反應(yīng)的標本必須經(jīng)過中和試驗確證以后才能判斷陽性或陰性。 HIV-1 P24抗原陽性僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診。 HIV-1 P24抗原陰性結(jié)果不能排除HIV感染。 監(jiān)測病程進展或抗病毒治療效果應(yīng)進行HIV-1 P24抗原的定量檢測。,HIV核酸檢測的意義,1 早期診斷：嬰幼兒或成人有急性HIV感染綜合癥或流行病學(xué)史，且不同時間的兩次HIV核酸檢測結(jié)果均為陽性，即可

12、診斷。使用多樣品集合的方法，HIV抗體陰性的高危人群樣品進行集合核酸檢測，及時發(fā)現(xiàn)窗口期感染。2 疑難樣本的輔助診斷：幫助提供HIV感染早期或終末期的證據(jù)。3 遺傳變異監(jiān)測：用于HIV-1和HIV-2感染的鑒別診斷、HIV感染傳播鏈的分析、HIV基因亞型和重組病毒的鑒定和分析以及人群HIV遺傳變異趨勢的監(jiān)測。4 耐藥性監(jiān)測：了解耐藥性病毒株流行的態(tài)勢和指導(dǎo)臨床醫(yī)生判斷抗病毒治療效果和修改抗病毒治療方案。5 病程監(jiān)控及預(yù)測

13、：有助于確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。6 指導(dǎo)抗病毒治療及療效判定,艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童HIV感染早期診斷檢測流程,HIV-1耐藥檢測,1 耐藥監(jiān)測用于HIV-1感染人群和抗病毒治療人群。用于新近感染人群的耐藥性監(jiān)測，了解耐藥毒株流行的情況；用于治療前人群的監(jiān)測，指導(dǎo)制定一線抗病毒治療方案；用于抗病毒治療人群的耐藥性監(jiān)測，進行HIV-1耐藥發(fā)生、發(fā)展趨勢以及影響因素的分析，指導(dǎo)和完善大規(guī)模公共衛(wèi)生模式抗病毒治療的程

14、序，以及制定二線治療方案。.2 耐藥檢測用于個體患者的耐藥檢測。在抗病毒治療前進行耐藥檢測，可指導(dǎo)臨床醫(yī)生制定抗病毒治療方案，保證抗病毒治療的效果；在抗病毒治療過程中進行耐藥檢測，可指導(dǎo)臨床醫(yī)生分析治療失敗的原因，并制定補救治療方案。,梅毒實驗室檢測,病原體檢測 暗視野顯微鏡檢查 鍍銀染色 熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體法血清學(xué)檢測 非梅毒螺旋體抗原血清試驗（非特異性試驗） 梅毒螺旋體

15、抗原血清試驗（特異性試驗）,病原體檢測——暗視野顯微鏡檢查,螺旋狀，纖細、白色、有折光的。長約為兩個紅細胞，有6-12個螺旋。具有旋轉(zhuǎn)、蛇行及伸縮等3種特征性的運動方式。,病原體檢測——鍍銀染色檢查,方法: 涂片干燥 →固定 →洗滌 →媒染 →銀染 →鏡檢 可見到染成棕褐色的梅毒螺旋體。,病原體檢測——直接熒光法,FITC熒光素標記的抗梅毒螺旋體單克隆抗體與樣本中的梅毒螺旋體結(jié)合，在熒光顯微鏡下，可見到發(fā)黃綠色熒光的梅毒螺

16、旋體。,病原體檢測,具有快速、方便、易操作的特點。是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方法。未見到梅毒螺旋體，不能排除罹患梅毒，可讓患者復(fù)查及進行血清學(xué)檢查。,血清學(xué)檢測,非梅毒螺旋體抗原血清試驗 性病研究實驗室試驗（VDRL） 不加熱血清反應(yīng)素試驗（USR） 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR、TRUST）梅毒螺旋體抗原血清試驗 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA） 梅毒

17、螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA） 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA） 梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT）,非梅毒螺旋體抗原血清試驗,以心磷脂、卵磷脂、膽固醇為抗原,檢測抗類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素），主要是IgM和IgG混合體。方法簡單、快速、價格低廉、敏感性和特異性較好，適用于大量人群的篩查。治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)為陰性，可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染指征。梅毒治療后部份病人存在血清固定現(xiàn)象。用于鑒別先天

18、梅毒與被動反應(yīng)素血癥。VDRL試驗主要用于神經(jīng)梅毒的腦脊液檢查。艾滋病人合并感染梅毒，血清試驗呈陰性。存在一定的假陽性。不同試驗的結(jié)果沒有可比性。,前帶現(xiàn)象,指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒。將血清稀釋后再進行試驗，出現(xiàn)陽性的結(jié)果。有前帶現(xiàn)象的病人在臨床治療中應(yīng)注意“賈赫氏反應(yīng)”。,血清固定（耐血清性）,指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗

19、在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)，而保持低滴度陽性（1：4以內(nèi)）的反應(yīng)。早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。晚期血清固定與梅毒的類型及開始治療的時間早晚有關(guān)。對于這種病人，在經(jīng)過詳細的檢查，特別是在除外神經(jīng)、心臟與其他內(nèi)臟梅毒后，應(yīng)停止治療，作定期隨訪。,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗,梅毒血清學(xué)試驗的假陽性反應(yīng),梅毒血清學(xué)試驗假陽性反應(yīng)的對策,技術(shù)性假陽性反應(yīng) 由于標本的保存不當(dāng)（如細菌污染或溶血）

20、、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也僮麇e誤所造成，可通過重復(fù)試驗來排除。生物學(xué)假陽性反應(yīng) 是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性。非梅毒螺旋體抗原的血清學(xué)試驗可做FTA-ABS、TPHA（TPPA）等確證試驗進行排除。梅毒螺旋體抗原的血清學(xué)試驗時應(yīng)對病人進行全面檢查、密切隨訪。,梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果,梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果,非梅毒螺旋體抗原血清試驗 (確證是否為現(xiàn)癥病人)

21、 ↓↑互為確證 梅毒螺旋體抗原血清試驗 (確證是否為感染者),胎傳梅毒的實驗診斷方法,早期先天梅毒 暗視野檢查：胎盤、臍帶、鼻分泌物、皮膚黏膜。 血清學(xué)檢查晚期先天梅毒 血清學(xué)檢查,胎傳梅毒的實驗診斷,暗視野檢查梅毒螺旋體陽性?；純悍敲范韭菪w血清抗體滴度持續(xù)上升?；純悍敲范韭菪w血清學(xué)定量試驗結(jié)果比母親高4倍?；純簷z出19S-IgM抗體。,神經(jīng)梅毒

22、的實驗室診斷,梅毒血清學(xué)檢查陽性。腦脊液細胞計數(shù)蛋白質(zhì)測定結(jié)果異常。腦脊液VDRL試驗陽性。腦脊液檢測到IgM抗體。,丙肝實驗室檢測,抗-HCV檢測􀂙HCV 抗原檢測􀂙定量HCV RNA檢測􀂙HCV基因型和亞型檢測,HCV-RNA檢測,1.HCV RNA測定定性套式PCR.2.HCV RNA定量方法包括DNA探針技術(shù)、競爭PCR法、熒光定量法等， 3.定量測定有

23、助于了解病毒復(fù)制程度、抗病毒治療的選擇及療效評估等。4.對HCV RNA尚可進行基因分型，方法包括序列測定、PCR、酶切、探針雜交等。,4影響實驗室檢測的因素分析,每一個生物學(xué)實驗都有可能得出假陽性或假陰性的結(jié)果生物學(xué)實驗的準確性用以下三種參數(shù)來描述:? 敏感性? 特異性? （陰、陽性）預(yù)示值? 應(yīng)考慮人群感染率,4.1檢測結(jié)果準確性的計算,A= 感染，檢測陽性結(jié)果(真陽性)B= 未感染，檢測陽性結(jié)果(假

24、陽性)C= 感染，檢測陰性結(jié)果(假陰性)D= 未感染，檢測陰性結(jié)果(真陰性)A+C = 真正感染HIV的總?cè)藬?shù)B+D = 真正未感染HIV的總?cè)藬?shù),4.2敏感性與陽性預(yù)示值,實驗?zāi)軌驕蚀_發(fā)現(xiàn)真實病例的能力。高敏感性的實驗很少給出假陰性的結(jié)果。高敏感性的實驗通常用于絕對需要極少的假陰性結(jié)果的情況，例如獻血檢測。 敏感性Sen = A/（A+C）×100% 陽性預(yù)示值PPV = A/(A+B) ×

25、;100%,4.3特異性與陰性預(yù)示值,實驗?zāi)軌驕蚀_定義“真實的非病例”的能力。高特異性實驗很少給出假陽性的結(jié)果，高特異性的實驗通常用于絕對需要極少的假陽性結(jié)果的情況，例如臨床診斷個體HIV感染。 特異性Spe = D/(B+D) ×100% 陰性預(yù)示值NPV = D/(C+D) ×100%,4.4影響實驗室檢測結(jié)果舉例說明,HBV,HCV,HIV,梅毒,4.5實驗室檢測中應(yīng)注意的問題,1.針對感染不同時