非小細(xì)胞肺癌患者egfr基因檢測

1、NSCLC患者EGFR基因突變檢測,,腺癌的驅(qū)動基因,Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010,97%的基因突變互相排斥,Kris MG. et al. ASCO 2011, Abstract # CRA7506.,4,高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖,5,中國人肺腺癌各基因構(gòu)成比圖,關(guān)于“驅(qū)動基因”,近50% NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)雙基因

2、同時突變罕見對已知的靶點(diǎn)，已有很多上市或在研的藥物驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。,NSCLC基因檢測的意義,基因檢測決定了分子靶向治療2011年我國制定了:中國非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識,EGFR基因突變檢測的臨床意義,EGFR-TKI一線治療必須進(jìn)行EGFR基因突變的檢測，國內(nèi)外均推薦EGFR基因突變陽性的NSCLC給予EGFR-TKI一線治療優(yōu)勢人群不代

3、表個體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測到EGFR基因突變。,EGFR基因突變檢測的臨床意義,EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好,檢測的必要性,EGFR基因突變檢測的臨床意義,化療能改變EGFR突變狀態(tài)264例一線化療的Шb~IV期NSCLC患者的血DNA標(biāo)本，EGFR突變率在化療后顯著降低（23.1%對34.5%，P<0.

4、001）提示檢測更有必要，決定TKI一線治療的時機(jī),全國檢測情況(基康+迪安),國內(nèi)EGFR基因突變率,在我國未經(jīng)選擇的NSCLC中EGFR突變約30%，腺癌突變約42.5%，非腺癌約9.5%。2012年基康公司共收到1500名患者樣品，全部完成檢測，其中108名患者的樣品因DNA質(zhì)量不合格而終止檢測，因此共有1392名患者已出檢測結(jié)果，其中660名患者突變陽性（47%），其中腺癌、腺鱗癌、BAC為52%，鱗癌為14%。,國內(nèi)EGF

5、R基因突變率,銅陵檢測結(jié)果（ARMS法）,送檢66份標(biāo)本, 11份無結(jié)果，55份有結(jié)果，檢出率83.33%，不同標(biāo)本檢出率,EGFR突變率,55份有結(jié)果的標(biāo)本中，29份EGFR突變陽性，突變率55.7%,EGFR突變類型,EGFR突變與病理類型,EGFR基因突變檢測的一般原則,為使患者盡可能地從最有效的治療中受益，所有NSCLC，只要條件許可，都應(yīng)進(jìn)行EGFR突變的檢測，特別是肺腺癌。,EGFR基因突變檢測標(biāo)本,腫瘤部位的新鮮組織、活檢

6、組織、手術(shù)切除標(biāo)本和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本均可用于EGFR突變的檢測。理想的標(biāo)本，需保證200～400個腫瘤細(xì)胞（文獻(xiàn)報道大于100個即可）,檢測標(biāo)本,冰凍組織外科手術(shù)標(biāo)本：最好標(biāo)本，可獲得高質(zhì)量腫瘤DNA，取得可靠檢測結(jié)果---廣泛使用穿刺活檢、支氣管鏡標(biāo)本：量少，但腫瘤DNA質(zhì)量仍好，獲得較可靠檢測結(jié)果---使用受限,檢測標(biāo)本,固定包埋組織外科手術(shù)標(biāo)本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測結(jié)果---使用受限支氣管

7、鏡、穿刺活檢標(biāo)本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。---極度受限,檢測標(biāo)本,淋巴結(jié)標(biāo)本也可——淋巴結(jié)標(biāo)本中EGFR突變能否反映原發(fā)灶中EGFR狀態(tài)？外周血、癌性胸水、經(jīng)支氣管細(xì)針穿刺標(biāo)本有研究也有陽性結(jié)果外周血標(biāo)本：血漿中游離DNA（cfDNA）濃度變化很大（10~1200ng/ml）, cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡產(chǎn)生，腫瘤釋放的cfDNA在總cfDNA中的含量不穩(wěn)定（3%~93%

8、）胸水可以做——前景很好,標(biāo)本的處理,新鮮組織（手術(shù)、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）含有腫瘤組織50%以上；重量≥10ｍg（約米粒大小，盡量提供所有穿刺樣本），經(jīng)PBS或生理鹽水沖洗干凈。取癌組織的中心位置組織塊，切至厚度在0.5cm以下，浸沒于75～100%的乙醇中60分鐘以上；可在4℃冰箱暫時保存。送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標(biāo)準(zhǔn)試管，擰緊蓋子，常溫運(yùn)輸，確保樣本在3天內(nèi)到達(dá)。,標(biāo)本的處理,癌性胸水脫落細(xì)胞盡量收集更

9、多胸水，離心后去掉上清，沉淀物必須>1毫升。如需長途運(yùn)輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。為符合托運(yùn)要求，可付運(yùn)前可離心后倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標(biāo)準(zhǔn)試管，擰緊蓋子，常溫運(yùn)輸，確保3天內(nèi)到達(dá)。,EGFR檢測方法,目前公認(rèn)有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）,EGFR檢測方法,EGFR檢測方法,北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC直接測序法中24例無結(jié)果，ARMS法均有結(jié)果，且16例檢測到變異

10、 中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）,,關(guān)于胸水EGFR突變的檢測,Cancer Sci. 2006;97(7):642-8. Int J Cancer. 2006;119(10):2353-8. Chang Gung Med J. 2006;29(4):373

11、-9. Br J Cancer. 2006;95(10):1390-5. J Cancer Res Clin Oncol. 2010;136(9):1341-7.,國內(nèi)外胸水標(biāo)本EGFR檢測的研究,,用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法用胸水中細(xì)胞及無細(xì)胞液均可檢測EGFR突變，且檢出率基本相同目前缺少胸水與腫瘤組織直接對比（配對樣本檢測）數(shù)據(jù)，故對其敏感度與特異性尚無結(jié)論,胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究,本研究的目的：探索胸腔積液

12、與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當(dāng)存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。收集2011年4月-2012年12月間就診于上海長海醫(yī)院呼吸科符合入組條件患者的胸液標(biāo)本及相應(yīng)的胸膜轉(zhuǎn)移病灶組織，共35對樣本。,研究步驟,胸膜轉(zhuǎn)移灶樣本采集電子胸腔鏡在局麻下進(jìn)行胸腔鏡檢查術(shù)鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊每例蠟塊切取10-12片5μm 厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h

13、后常溫保存,研究步驟,胸腔積液樣本采集每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細(xì)胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本），為待檢測的胸液沉淀；每例蠟塊切取10-12片5μm 厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存。,胸膜活檢組織EGFR突變狀況,胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGF

14、R突變的比較,符合率為73.1%,胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較,符合率為85.7%,胸液上清與相應(yīng)沉淀EGFR突變的比較,符合率為80.8%,胸液EGFR突變檢測率的比較,結(jié) 論,以ARMS方法檢測胸液中EGFR突變狀態(tài)，與經(jīng)胸腔鏡取得的組織標(biāo)本中的EGFR突變狀態(tài)吻合率高；臨床上可以通過檢測胸液，尤其是結(jié)合胸液上清和沉淀EGFR突變狀況，來指導(dǎo)EGFR-TKIs的治療。對于晚期NSCLC患者，明確EGFR突變狀態(tài)至關(guān)