非小細胞肺癌患者egfr基因檢測

1、NSCLC患者EGFR基因突變檢測,,腺癌的驅動基因,Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010,97%的基因突變互相排斥,Kris MG. et al. ASCO 2011, Abstract # CRA7506.,4,高加索人腺癌各基因構成比圖,5,中國人肺腺癌各基因構成比圖,關于“驅動基因”,近50% NSCLC驅動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)雙基因

2、同時突變罕見對已知的靶點，已有很多上市或在研的藥物驅動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關，不同類型用藥不同。,NSCLC基因檢測的意義,基因檢測決定了分子靶向治療2011年我國制定了:中國非小細胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識,EGFR基因突變檢測的臨床意義,EGFR-TKI一線治療必須進行EGFR基因突變的檢測，國內外均推薦EGFR基因突變陽性的NSCLC給予EGFR-TKI一線治療優(yōu)勢人群不代

3、表個體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測到EGFR基因突變。,EGFR基因突變檢測的臨床意義,EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好,檢測的必要性,EGFR基因突變檢測的臨床意義,化療能改變EGFR突變狀態(tài)264例一線化療的Шb~IV期NSCLC患者的血DNA標本，EGFR突變率在化療后顯著降低（23.1%對34.5%，P<0.

4、001）提示檢測更有必要，決定TKI一線治療的時機,全國檢測情況(基康+迪安),國內EGFR基因突變率,在我國未經(jīng)選擇的NSCLC中EGFR突變約30%，腺癌突變約42.5%，非腺癌約9.5%。2012年基康公司共收到1500名患者樣品，全部完成檢測，其中108名患者的樣品因DNA質量不合格而終止檢測，因此共有1392名患者已出檢測結果，其中660名患者突變陽性（47%），其中腺癌、腺鱗癌、BAC為52%，鱗癌為14%。,國內EGF

5、R基因突變率,銅陵檢測結果（ARMS法）,送檢66份標本, 11份無結果，55份有結果，檢出率83.33%，不同標本檢出率,EGFR突變率,55份有結果的標本中，29份EGFR突變陽性，突變率55.7%,EGFR突變類型,EGFR突變與病理類型,EGFR基因突變檢測的一般原則,為使患者盡可能地從最有效的治療中受益，所有NSCLC，只要條件許可，都應進行EGFR突變的檢測，特別是肺腺癌。,EGFR基因突變檢測標本,腫瘤部位的新鮮組織、活檢

6、組織、手術切除標本和細胞學標本均可用于EGFR突變的檢測。理想的標本，需保證200～400個腫瘤細胞（文獻報道大于100個即可）,檢測標本,冰凍組織外科手術標本：最好標本，可獲得高質量腫瘤DNA，取得可靠檢測結果---廣泛使用穿刺活檢、支氣管鏡標本：量少，但腫瘤DNA質量仍好，獲得較可靠檢測結果---使用受限,檢測標本,固定包埋組織外科手術標本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測結果---使用受限支氣管

7、鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結果，有時DNA量少。---極度受限,檢測標本,淋巴結標本也可——淋巴結標本中EGFR突變能否反映原發(fā)灶中EGFR狀態(tài)？外周血、癌性胸水、經(jīng)支氣管細針穿刺標本有研究也有陽性結果外周血標本：血漿中游離DNA（cfDNA）濃度變化很大（10~1200ng/ml）, cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡產(chǎn)生，腫瘤釋放的cfDNA在總cfDNA中的含量不穩(wěn)定（3%~93%

8、）胸水可以做——前景很好,標本的處理,新鮮組織（手術、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）含有腫瘤組織50%以上；重量≥10ｍg（約米粒大小，盡量提供所有穿刺樣本），經(jīng)PBS或生理鹽水沖洗干凈。取癌組織的中心位置組織塊，切至厚度在0.5cm以下，浸沒于75～100%的乙醇中60分鐘以上；可在4℃冰箱暫時保存。送檢前可倒掉試管內的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內到達。,標本的處理,癌性胸水脫落細胞盡量收集更

9、多胸水，離心后去掉上清，沉淀物必須>1毫升。如需長途運輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。為符合托運要求，可付運前可離心后倒掉試管內的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保3天內到達。,EGFR檢測方法,目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）,EGFR檢測方法,EGFR檢測方法,北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC直接測序法中24例無結果，ARMS法均有結果，且16例檢測到變異

10、 中華病理學雜志，2008,37（5）,,關于胸水EGFR突變的檢測,Cancer Sci. 2006;97(7):642-8. Int J Cancer. 2006;119(10):2353-8. Chang Gung Med J. 2006;29(4):373

11、-9. Br J Cancer. 2006;95(10):1390-5. J Cancer Res Clin Oncol. 2010;136(9):1341-7.,國內外胸水標本EGFR檢測的研究,,用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法用胸水中細胞及無細胞液均可檢測EGFR突變，且檢出率基本相同目前缺少胸水與腫瘤組織直接對比（配對樣本檢測）數(shù)據(jù)，故對其敏感度與特異性尚無結論,胸膜轉移和胸水的對比研究,本研究的目的：探索胸腔積液

12、與胸膜轉移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當存在胸膜轉移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。收集2011年4月-2012年12月間就診于上海長海醫(yī)院呼吸科符合入組條件患者的胸液標本及相應的胸膜轉移病灶組織，共35對樣本。,研究步驟,胸膜轉移灶樣本采集電子胸腔鏡在局麻下進行胸腔鏡檢查術鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊每例蠟塊切取10-12片5μm 厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內烤片3h

13、后常溫保存,研究步驟,胸腔積液樣本采集每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；每例蠟塊切取10-12片5μm 厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內烤片3h后常溫保存。,胸膜活檢組織EGFR突變狀況,胸液沉淀與相應胸膜轉移灶EGF

14、R突變的比較,符合率為73.1%,胸液上清與相應胸膜轉移灶EGFR突變的比較,符合率為85.7%,胸液上清與相應沉淀EGFR突變的比較,符合率為80.8%,胸液EGFR突變檢測率的比較,結 論,以ARMS方法檢測胸液中EGFR突變狀態(tài)，與經(jīng)胸腔鏡取得的組織標本中的EGFR突變狀態(tài)吻合率高；臨床上可以通過檢測胸液，尤其是結合胸液上清和沉淀EGFR突變狀況，來指導EGFR-TKIs的治療。對于晚期NSCLC患者，明確EGFR突變狀態(tài)至關