pcdna3.0sv40t重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在鵝小腸上皮細胞中的表達

1、揚州大學碩士學位論文pcDNA3.0-SV40T重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在鵝小腸上皮細胞中的表達姓名：李融申請學位級別：碩士專業(yè)：動物營養(yǎng)與飼料科學指導教師：趙國琦20091201本試驗設計并構(gòu)建含有S V 4 0 T 基因的重組表達質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ．S V 4 0 T ，為小腸上皮細胞永生化研究提供穩(wěn)定、可靠的分子工具。通過將質(zhì)粒p G E M ．S V 4 0 T 進行X h o I 單酶切獲得S V 4 0 T 基因片

2、段，并將其插入真核表達質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 中，用分子克隆技術構(gòu)建重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ．S V 4 0 T 。經(jīng)酶切鑒定和測序證實，S V 4 0 T基因片段已經(jīng)成功地正向插入質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 中，重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ．S V 4 0 T 構(gòu)建成功。本試驗采用脂顧體轉(zhuǎn)染技術，將含有S V 4 0 T 基因的重組表達質(zhì)粒p c D N A 3 ：0 ：S V 4 0 T 導入

3、經(jīng)純化的鵝小腸上皮細胞稠過基因組D N 和檢測S V 4 0 T 基因在鵝小腸上皮細胞中的表達情況。根據(jù)設計的不．A 同P 引C 物R RT擴-P增CR序-一ysJ ，基因組D N A P C R 和R T - P C R 產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分別擴增出4 2 9 b p 和2 2 5 b p 的特異性條帶，表明S V 4 0 T 基因在鵝小腸上皮細胞中成功表達。從而，重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ：：S V 4 0 T 為進一