茶黃素中壓色譜制備及對大鼠平滑肌細胞的炎癥抑制作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、茶黃素是紅茶中的重要品質(zhì)成分,也是飲茶有益健康的重要活性成分,具有明顯的抗氧化、清除自由基、殺菌抑菌、抗過敏、防止動脈粥樣化、抗輻射等生物學功效。由于茶黃素單體分離存在一定的難度,在一定程度上限制了茶黃素生物學活性的研究,因此尋找一種簡單易行、高效低成本的茶黃素單體制備方法,并挖掘茶黃素新的生物學活性是當前業(yè)界的研究重點之一。
  本文在前期研究基礎(chǔ)上,以茶多酚為原料,應(yīng)用體外模擬氧化體系制備高茶黃素含量的茶色素;并進一步應(yīng)用中壓

2、制備色譜制得三種主要茶黃素單體;應(yīng)用AngII誘導的大鼠血管平滑肌細胞炎癥模型,研究了三種茶黃素單體對血管炎癥的影響,以期為茶黃素單體的抗炎研究提供理論參考。論文取得的主要結(jié)果如下:
  1.以茶多酚為原料,鮮葉中粗酶液為催化劑,雙液相酶促氧化制得高茶黃素(49.9%)含量的茶色素。
  2.以上述自制茶色素為原料,以反相C18為柱填料,使用MPLC色譜對茶黃素進行分離純化,用一步分離得到茶黃素(TF1)、茶黃素-3-單沒食

3、子酸酯(TF2a)和茶黃素雙沒食子酸酯(TF3)三種茶黃素單體,純度分別為94.6%、97.1%和95.6%。三種單體總得率達34.0%,總回收率66.8%。
  3.應(yīng)用AngII誘導的大鼠血管平滑肌細胞(VSMC)炎癥模型,通過RT-PCR檢測促炎細胞因子mRNA的表達,以EGCG為對照,研究了茶黃素對炎癥的影響。發(fā)現(xiàn)EGCG(40μM)、TF1(40μM、100μM)、TF3(100μM)均可顯著下調(diào)由AngII誘導的促炎因

4、子IL-6 mRNA的表達,抑制率分別達到44.3%、22.7%、51.4%、38.4%。
  4.采用DHE染色法檢測原位活性氧(ROS)的產(chǎn)生,結(jié)果表明:EGCG(40μM)、TF1(100μM)、TF3(100μM)均可降低由AngII刺激產(chǎn)生的大鼠血管平滑肌細胞中ROS水平。表明EGCG、TF1、TF3可能通過抑制ROS的增加,達到抵抗AngII引起的大鼠VSMC細胞炎癥作用。
  5.在上述炎癥模型中,進一步通過W

5、estern blotting檢測與炎癥相關(guān)信號蛋白p-IKK、p-p38/MAPK和TLR4蛋白的表達差異,初步探討了茶黃素抑制AngII誘導的血管平滑肌細胞炎癥的作用機制。發(fā)現(xiàn)EGCG(40μM)和不同濃度TF1(40μM、100μM)、TF3(40μM、100μM)干預后的p38/MAPK蛋白磷酸化沒有顯著變化;但EGCG(40μM)、TF1(100μM)和TF3(40μM、100μM)可使IKK蛋白的磷酸化表達分別降低了58.4

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