動物源性食品牛奶中六種氟喹諾酮藥物殘留檢測及快速篩查技術(shù)研究.pdf

1、目的:建立簡便、快速、重現(xiàn)性好的檢測方法同時測定牛奶中丹諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、雙氟沙星、沙拉沙星、恩諾沙星6種氟喹諾酮殘留量。
　　方法:1.采用薄層色譜(TLC)法對牛奶中可能殘留上述六種氟喹諾酮進行的檢測方法進行研究。樣品經(jīng)優(yōu)化的QuEChERS樣品前處理技術(shù)提取、凈化后，以甲醇-三氯甲烷-氨水-乙酸乙酯(10∶15∶2∶4)為展開劑，以3％的三氯化鋱乙醇溶液為顯色劑，在紫外光燈(365 nm)下檢視;2.采用高效液相色

2、譜串聯(lián)熒光檢測器(HPLC-FLD)法檢測動物源性食品牛奶中上述6種氟喹諾酮類藥物。按上述方法制備供試品溶液，采用熒光檢測器，以Waters XBridgeTM C18柱(4.6×250 mm，5μm)為色譜柱，以乙腈和含0.1％甲酸的20 mmol/L甲酸銨水溶液為流動相，激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為280 nm、450 nm，柱溫為30℃，流速為1.0 mL/min;3.采用高效液相色譜-紫外檢測器(HPLC-DAD)法快速篩查牛奶中上

3、述六種氟喹諾酮類藥物殘留。以Waters XBridgeTM C18柱(4.6×250 mm，5μm)為色譜柱，以乙腈和含0.1％甲酸的20 mmol/L甲酸銨水溶液為流動相，紫外檢測器，檢測波長279 nm;4.采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法確證牛奶中上述六種氟喹諾酮類藥物殘留種類及量的研究。以Agilent ZORBAX SB-C18(2.1×50 mm，1.8μm)為色譜柱，以乙腈和含0.1％甲酸的20 mm

4、ol/L甲酸銨水溶液為流動相，流速為0.5 mL/min，柱溫為45℃;進樣量為2μL，ESI離子源，毛細管電壓為3000～4000 kV;干燥氣溫度為300℃;干燥氣流量為5 mL/min;霧化氣壓力為50 psi;以N2為載氣;5.進一步驗證HPLC-FLD法測定牛奶中上述6種氟喹諾酮類藥物殘留的適用性及可行性。采用相同的前處理方法，在另一實驗室測定供試品溶液，以Waters XBridgeTM C18柱(4.6×250 mm，5μ

5、m)為色譜柱，在另一型號的高效液相色譜儀上按相同的色譜條件進行測定。
　　結(jié)果:1.在薄層色譜法中，6種氟喹諾酮在紫外光燈(365 nm)下檢視，分離效果比較好，并且每種成分的Rf值均在0.2～0.8之間;2.在HPLC-FLD法中，6種氟喹諾酮分離度均較好(R＞1.5)，6種氟喹諾酮在1～40 ng/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(γ=0.9999);樣品加標平均回收率在95.38％～100.08％之間，相對標準偏差(RSD)

6、在1.08％～4.37％之間;3.在HPLC-DAD法中，6種氟喹諾酮分離良好，6種氟喹諾酮在5～200 ng/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(γ=0.9999)。樣品加標平均回收率在95.77％～97.13％之間，相對標準偏差(RSD)在1.74％～3.03％之間。4.在超高效液相色譜結(jié)合質(zhì)譜法中，6種氟喹諾酮在2～100 ng/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，樣品平均加標回收率在104.52％～121.11％之間，RSD在3.0

7、2％～11.25％之間。5.在6種氟喹諾酮藥物殘留驗證實驗中，6種氟喹諾酮分離度均較好，6種氟喹諾酮在1～100 ng/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(γ=0.9999)。樣品加標平均回收率在91.07％～104.55％之間，相對標準偏差(RSD)在1.05％～4.28％之間。
　　結(jié)論:本課題建立的TLC方法簡單快速，適用于養(yǎng)牛場及基層單位初步篩查動物源性食品牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留;HPLC-DAD方法操作簡便，具有高通量、高