BCL9基因沉默對乳腺癌細胞株侵襲及遷移能力作用研究.pdf

1、目的：初步研究BCL9基因在三種乳腺癌細胞株中的表達差異，分析三種不同乳腺癌細胞株細胞生物學(xué)特性：增殖、侵襲及遷移能力的差異及其意義，并進一步探討B(tài)CL9基因的沉默對乳腺癌細胞株侵襲及遷移能力的影響及意義。
　　方法：
　　1.分析三種不同表型的人乳腺癌細胞株，采用實時熒光定量PCR法（Real-time PCR）和蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測人乳腺癌細胞株MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-4

2、53中BCL9的mRNA及蛋白表達水平，篩選出高表達BCL9的細胞株。
　　2.通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期，計算增殖指數(shù)，比較三種細胞株之間增殖能力。采用細胞劃痕實驗和Transwell細胞侵襲實驗比較三者細胞遷移和侵襲能力。
　　3.構(gòu)建BCL9慢病毒質(zhì)粒shRNA，針對高表達BCL9的細胞株做BCL9基因沉默實驗。
　　4.采用Transwell細胞小室以及細胞劃痕實驗進一步研究BCL9基因的敲除對乳腺癌細胞株侵襲

3、及遷移能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1.RT-PCR檢測細胞株BCL9的mRNA表達:MDA-MB-231（0.016±0.004）>MCF-7（0.008±0.002）>MDA-MB-453（0.004±0.002），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。BCL9蛋白水平在細胞間表達量為MDA-MB-231（0.629±0.101）>MCF-7（0.397±0.196）>MDA-MB-453（0.204±0.990），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；

4、>　　2.流式細胞術(shù)增殖指數(shù)顯示 MDA-MB-231（0.483±0.010）>MDA-MB-453（0.358±0.032）,MCF-7（0.397±0.061），差別有統(tǒng)計學(xué)意義；Transwell細胞侵襲實驗：穿膜細胞數(shù)：MDA-MB-231（417.80±6.94）>MDA-MB-453（379.60±11.99）>MCF-7（9.40±1.14）,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；細胞劃痕實驗：MDA-MB-231（0.716±0.021）

5、>MDA-MB-453（0.331±0.021）>MCF-7（0.272±0.017），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.針對人乳腺癌細胞株MDA-MB-231運用慢病毒細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)進行BCL9基因沉默；
　　4.Transwell細胞小室實驗細胞數(shù)：空白組（420.50±3.704）/陰性對照組（417.00±5.310）>實驗組（151.50±7.580），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；細胞劃痕實驗劃痕愈合率：空白組（0.712±0.12

6、7）/陰性對照組（0.709±0.015）>實驗組（0.382±0.012），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.通過檢測三種人乳腺癌細胞株中BCL9基因及蛋白的表達水平，發(fā)現(xiàn)BCL9在三陰性乳腺癌細胞株MDA-MB-231細胞中表達水平較高。
　　2.通過分析三種不同表型乳腺癌細胞株，細胞的增殖、侵襲和遷移能力均有差別，三陰性乳腺癌的MDA-MB-231細胞株的增殖、侵襲和遷移能力均較高。
　　3.BCL9