E2F1通過靶向作用于miR-519d上調(diào)RhoC的表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:E2F1(E2F轉(zhuǎn)錄因子1)的作用取決于癌癥的類型。在胃癌和霍奇金淋巴瘤中,E2F1作為腫瘤抑制因子,而在小細(xì)胞肺癌和透明細(xì)胞腎癌中,E2F1作為癌基因。在這里,研究E2F1對卵巢癌發(fā)生和進(jìn)展的作用及其分子機(jī)制。
  方法:通過免疫組織化學(xué)方法檢測卵巢癌組織中E2F1的表達(dá)水平。E2F1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和E2F1-microRNA-519d(miR-519d)/si-RhoC(Ras同源基因家族成員C)共轉(zhuǎn)染后,通過MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞

2、周期實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染對卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780和OVCAR3細(xì)胞表型的影響。通過裸鼠成瘤模型驗(yàn)證E2F1和miR-519d對卵巢癌發(fā)生發(fā)展的作用;通過RT-PCR和Western blot檢測E2F1和miR-519d對A2780和OVCAR3細(xì)胞基因型的影響。通過雙熒光素酶報告基因測定以確認(rèn)E2F1靶向作用于miR-519d,miR-519d靶向作用于RhoC。使用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)和

3、Mann-Whitney U檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
  結(jié)果:分別與正常卵巢組織和正常輸卵管組織相比,E2F1在Ⅰ型和Ⅱ型卵巢癌中的表達(dá)均顯著上升(P<0.05)。E2F1過度表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖(P<0.05),促進(jìn)細(xì)胞G1/S進(jìn)展(P<0.05),促進(jìn)細(xì)胞存活(P<0.05),促進(jìn)細(xì)胞遷移(P<0.05)和體外侵襲(P<0.05);miR-519d或siRhoC共轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)E2F1致癌作用(P<0.05)。E2F1過表達(dá)促進(jìn)體內(nèi)腫瘤生

4、長,miR-519d過表達(dá)抑制體內(nèi)腫瘤生長。E2F1過表達(dá)上調(diào)RhoC、Bcl-2、cyclinD1、survivin、MMP2(基質(zhì)金屬蛋白酶2)、MMP9、STAT3(信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3)和HuR(ELAV樣RNA結(jié)合蛋白1)表達(dá),miR-519d過表達(dá)降低這些基因的表達(dá)。
  結(jié)論:我們的研究結(jié)果表明E2F1在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中起到促癌作用。E2F1可以靶向作用于miR-519d的啟動子,下調(diào)miR-519d的表達(dá),mi

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