乳中主要共軛亞油酸異構(gòu)體的分析.pdf

1、共軛亞油酸(conjiugated linoleic acid,CLA)是一類含共軛雙鍵亞油酸的位置(6-8,7-9,9-11,11-13,13-15)和幾何(cis,cis；cis,trans;trans,cis；trans,trans)異構(gòu)體的總稱,是反芻動物乳、肉中存在的天然脂肪酸。CLA具有多種有益的生理活性。研究證實了不同的CLA有不同的生理活性,已經(jīng)公認的如9c,11t-CLA具有抗癌活性,抗粥樣動脈硬化,免疫調(diào)節(jié)的功能；1

2、0t,12c-CLA可抑制脂肪的合成,具有減肥的作用。因而建立可靠的分析方法確定食品中共軛亞油酸異構(gòu)體組成,分析CLA異構(gòu)體的種類,對于研究CLA結(jié)構(gòu)與生理活性的關(guān)系以及共扼亞油酸在食品中的應(yīng)用,都有著十分重要的意義。乳脂肪是豐富的天然CLA的來源,全乳平均1 g脂肪含CLA約有10 mg,牛奶中CLA的主要異構(gòu)體是生理活性很強的9c,11t-CLA,約占90％。為分析不同乳中CLA的準確含量和類型,了解各種因素對乳及乳制品中CLA含量

3、的影響,建立快速準確的分析方法是非常必要的。
　　 本研究采用銀離子高效液相色譜法(Ag+-HPLC)法和膠束電動色譜法(MEKC)對幾種奶樣中主要的CLA異構(gòu)體的含量進行了分析測定,研究中對乳脂的提取,樣品的處理方法以及儀器分析條件進行了優(yōu)化,較好地提高了分析水平,主要結(jié)果如下:
　　 1.對不同的乳脂提取方法進行比較。結(jié)果表明,在提取試劑為正己烷:異丙醇=1:1(v/v)時,采用超聲波輔助提取乳脂,提取乳脂的效果最佳

4、。
　　 2.比較不同的甲酯化方法對對乳脂中CLA的酯化效果的影響,確定NaOCH3-CH3OH進行酯化的效果較好,甲酯化較完全,并以響應(yīng)面法對其進行優(yōu)化,其最優(yōu)條件為NaOCH3-CH3OH添加量為8.56 mL,反應(yīng)溫度為24.4℃,反應(yīng)時間為12.8 min。
　　 3.采用一根銀離子柱的Ag+-HPLC對CLA異構(gòu)體進行分離,可實現(xiàn)對兩種生理活性較強的CLA異構(gòu)體9c,11t-CLA和10t,12c-CLA的初步

5、分離。在7.812～500μg/mL范圍內(nèi),HPLC分析的峰面積與9c,11t-CLA的進樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,可用于對樣品中的9c,11t-CLA進行定量分析。
　　 4.優(yōu)化了MEKC的分離條件:分離電壓25 kV,柱溫20℃,進樣時間10 s。在優(yōu)化的條件下(分離電壓25 kV,柱溫20℃,進樣時間10 s),MEKC可達到對9c,11t-CLA與10t,12c-CLA標品的良好分離。以MEKC法對鮮奶、巴氏奶、超高溫瞬

6、時滅菌奶(UHT)中CLA含量及組成進行分析,CLA總含量(9c,11t-CLA與10t,12c-CLA含量的總和):鮮奶為9.281 mg/g乳脂、巴氏奶為9.129 mg/g乳脂、UHT為8.631 mg/g乳脂,各奶樣間9c,11t-CLA與10t,12c-CLA比例無顯著差異；牛奶、水牛奶、羊奶中CLA總含量(9c,11t-CLA與10t,12c-CLA含量的總和)分別為9.220 mg/g乳脂、2.972 mg/g乳脂、6.0

7、54 mg/g乳脂,各奶樣間9c,11t-CLA與10t,12c-CLA比例差異顯著。
　　 5.采用Ag+-HPLC對不同處理和條件的奶樣進行分析,發(fā)現(xiàn)熱處理(巴氏殺菌、超高溫瞬時滅菌)對奶中9c,11t-CLA的含量均有影響,超高溫瞬時滅菌可降低CLA的含量,影響最大；保存時間也可影響奶中的9c,11t-CLA含量,隨保存時間增加,各奶樣中的9c,11t-CLA含量均下降,下降幅度從大到小依次為乳脂,巴氏殺菌奶,鮮奶,UHT