2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:①觀察TGFβ2和TGFβ2抗體作用于體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞(hLEC)后,對細胞增殖、轉(zhuǎn)分化特異性標記物αSMA和FN mRNA表達、信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白Smad4動態(tài)表達的影響。②測定兔眼晶狀體前囊膜片囊袋內(nèi)再植入術(shù)后各時間點房水中總量和活性TGFβ2濃度,觀察其波動規(guī)律。③活體觀察TGFβ2和TGFβ2抗體作用于兔眼晶狀體前囊膜片囊袋內(nèi)再植入術(shù)后各時間點轉(zhuǎn)分化特異性標記物αSMA和FN mRNA表達的差異。探索TGFβ2抗體

2、影響LEC轉(zhuǎn)分化的效果和機制。 方法:⑴體外培養(yǎng)的hLEC中分別添加A組10ng/ml hTGFβ2,B組0.3μg/mlTGFβ2抗體,C組10ng/ml hTGFβ2+0.3μg/mlTGFβ2抗體,對照組0.9%生理鹽水。MTT法測定對細胞增殖的影響、RT-PCR方法測定8,16,24和48h各時點αSMA和FN mRNA的表達,Western blot方法觀察2,8,16和24h各時點Smad4蛋白的表達。⑵20只新西蘭

3、白兔,一眼行晶狀體超聲乳化聯(lián)合前囊膜片囊袋內(nèi)再植入術(shù),另一眼為對照。術(shù)后1,3,7,14和28d抽取術(shù)眼和對照眼房水樣本,ELISA法測定總量和活性TGFβ2濃度。⑶在兔眼晶狀體超聲乳化聯(lián)合前囊膜片囊袋內(nèi)再植入術(shù)后3天囊袋內(nèi)注射A組10ng/mlhTGFβ2,B組0.3μg/mlTGFβ2抗體,C組10ng/mlhTGFβ2+0.3μg/mlTGFβ2抗體,對照組平衡鹽溶液各100μl,RT-PCR和實時熒光定量PCR方法測定術(shù)后5、1

4、0、15d囊袋組織樣本中轉(zhuǎn)分化標志物αSMA和FN mRNA的表達量,病理組織切片HE染色法和免疫組織化學(xué)法觀察LEC、αSMA和FN蛋白的分布。 結(jié)果:①hLEC體外培養(yǎng)添加了TGFβ2和TGFβ2抗體后,MTT法檢測A組(0.154±0.006) hLEC增殖受到抑制,與對照組(0.191±0.008)相比存在統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P<0.05);B組(0.203±0.014)和C組(0.202±0.008) hLEC增殖未受到抑

5、制,與對照組(0.191±0.008)相比無統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P>0.05)。RT-PCR法檢測A組8h即可出現(xiàn)αSMA和FN mRNA表達并持續(xù)至48h,B組和對照組48h出現(xiàn)αSMA和FN mRNA表達陽性,C組24h和48h出現(xiàn)αSMA和FN mRNA表達陽性。Western blot法檢測A組各時間點均可檢測到Smad4蛋白,2h有表達(1.51g/L),16h達到峰值(3.15g/L)。對照組、B組和C組在2h和8h Smad4

6、蛋白相對含量較低。②ELISA法測定兔眼術(shù)后房水樣本發(fā)現(xiàn)術(shù)后1d房水中總量TGFβ2濃度升高,維持較高水平超過術(shù)后28d;活性TGFβ2濃度術(shù)后1、3d下降,術(shù)后7d恢復(fù)至術(shù)前水平。③RT-PCR法檢測,各組術(shù)后5d即可出現(xiàn)αSMA表達陽性,持續(xù)至術(shù)后15d。A組術(shù)后5d出現(xiàn)FN mRNA表達,持續(xù)至術(shù)后15d,B組、C組和對照組術(shù)后10和15d出現(xiàn)FN mRNA表達陽性。實時熒光定量PCR檢測,術(shù)后5dA組(4.339±0.196)α

7、SMA mRNA表達明顯高于對照組(2.043±0.159)(P<0.05),B組(0.797±0.023)和C組(1.214±0.121)αSMA mRNA表達明顯低于對照組(2.043±0.159)(P<0.05)。術(shù)后10d A組(1.941±0.220)αSMA mRNA表達量明顯高于對照組(1.494±0.054)(P<0.05)。B組(1.108±0.257)和C組(1.373±0.163)αSMA mRNA表達量與對照組(

8、1.494±0.054)無統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P>0.05)。病理組織切片HE染色術(shù)后1d前囊膜LEC增殖,后囊膜未見LEC附著。術(shù)后3d后囊膜見LEC移行、附著。免疫組織化學(xué)法檢測術(shù)后5d A組和B組囊膜間隙LECαSMA染色陽性。 結(jié)論:兔眼晶狀體前囊膜片再植入術(shù)后房水中總量TGFβ2濃度升高,維持高水平超過28d;活性TGFβ2濃度降低,至術(shù)后7d恢復(fù)到術(shù)前水平。TGFβ2抗體可以對抗TGFβ2抑制LEC增殖的作用,減少通用型

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