大鼠睪丸cDNA文庫的免疫學(xué)篩選及大鼠新基因的特征分析.pdf

1、利用異種同源基因誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的自體免疫反應(yīng)可以產(chǎn)生抗腫瘤作用，尋找新的有價值和有效的腫瘤異種同源免疫治療靶分子有重要意義。本研究通過篩選大鼠睪丸文庫以獲得有潛在治療價值的異種同源cDNA序列。在篩選新的靶分子時獲得了一條大鼠的新基因序列R2，為盡快獲得新基因的功能提示，需獲取新基因的全長序列，研究其組織表達(dá)譜，并進(jìn)行初步的生物信息學(xué)分析。 方法：本研究在重組cDNA表達(dá)文庫的血清學(xué)分析(Serologicalanalysisof

2、recombinantcDNAexpressionlibrary，SEREX)技術(shù)基礎(chǔ)上，采用人乳腺癌和卵巢癌細(xì)胞株分別免疫兔的血清篩選大鼠睪丸cDNA表達(dá)文庫。篩選到的陽性克隆進(jìn)行了內(nèi)部剪切、核苷酸測序、插入片段的生物信息學(xué)分析和基因功能預(yù)測。我們采用RACE技術(shù)結(jié)合低嚴(yán)格度RT-PCR技術(shù)獲得了新基因的全長cDNA序列，用RT-PCR技術(shù)檢測了該新基因的大鼠組織表達(dá)譜，并結(jié)合多種生物信息學(xué)手段對其性質(zhì)和功能進(jìn)行分析和預(yù)測。

3、結(jié)果：獲得的14個陽性克隆中發(fā)現(xiàn)了與人的基因序列有相似性的大鼠基因序列，其中一些基因序列編碼的氨基酸或蛋白與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，有可能成為腫瘤異種同源治療的候選基因。得到了大鼠新基因兩個可變剪接本RTAP2a和RTAP2b的全長cDNA序列，兩個可變剪接本在大鼠組織的表達(dá)譜存在差異，生物信息學(xué)預(yù)測可能執(zhí)行不同的功能。 結(jié)論：本研究經(jīng)免疫學(xué)方法篩選了腫瘤異種同源免疫治療的候選分子，并獲得了大鼠新基因兩個可變剪接本的全長cDNA