PTH對MC3T3-E1細胞分化過程中Cbfα1表達的影響.pdf

1、目的： 研究分別以hPTH1-34間歇、持續(xù)刺激小鼠前成骨細胞MC3T3—El時Cbfαl表達的變化；證實了不同給藥方式對CbfαlmRNA表達的影響；探討hPTH1-34對骨形成作用的分子機制；最終為臨床上PTH治療骨質(zhì)疏松的有效性、量效關系、給藥方式提供試驗依據(jù)。 方法： (1)MC3T3—El細胞的傳代培養(yǎng)。 (2)采用經(jīng)典方法誘導MC3T3—El細胞，在MC3T3—El細胞培養(yǎng)的1、3、6、9、1

2、2、15天通過RT—PCR方法分析Cbfαl的表達，觀察CbfαlmRNA表達最強的時間。 (3)MC3T3—El細胞分兩組：PTH間歇刺激組：僅在每個培養(yǎng)周期(24小時)前6小時的培養(yǎng)液中加PTH；PTH持續(xù)刺激組：在每個培養(yǎng)周期的培養(yǎng)液中持續(xù)加入PTH。每組分三個濃度組(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)和對照組(在每個培養(yǎng)周期中均不加PTH)。在CbfαlmRNA表達最強的時間檢測上述各組的Cbf

3、αlmRNA表達。比較PTH不同刺激方法、不同濃度對MC3T3—El細胞分化過程中CbfαlmRNA表達的影響。 (4)統(tǒng)計學方法：計量資料用均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件包進行析因設計資料的方差分析，同一刺激組內(nèi)采用直線相關分析，P＜0.05有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： (1)RT—PCR結(jié)果顯示MC3T3—El細胞接種培養(yǎng)的第1天起細胞內(nèi)即可見CbfαlmRNA的表達，隨著MC3T3—

4、El細胞的分化，CbfαlmRNA的表達量逐漸增高，至第9天到高峰。 (2)析因試驗結(jié)果的方差分析顯示hPTH1-34的刺激方式、濃度變化、刺激方式和濃度的交互作用對MC3T3—El細胞的CbfαlmRNA的表達有影響(P＜0.05)。hPTH1-34以10-6mol/L濃度、間歇刺激的方式對CbfαlmRNA表達刺激最強。從散點圖觀察同一刺激方法組內(nèi)不同濃度與CbfαlmRNA表達兩變量間呈直線趨勢，直線相關分析顯示間歇刺激組