Cdc42信號(hào)蛋白在ACTH保護(hù)足細(xì)胞機(jī)制中的作用探討.pdf

1、目的：通過觀察分析促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)作用于阿霉素(ADR)誘導(dǎo)損傷的足細(xì)胞后nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達(dá)的變化，來初步探討cdc42信號(hào)蛋白在ACTH保護(hù)足細(xì)胞的具體地位作用。
　　方法：1.足細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)：將凍存于液氮中的條件永生型小鼠足細(xì)胞E11細(xì)胞快速融化后于33℃中增殖培養(yǎng)，3~4天傳代一次，然后取生長至約90％的足細(xì)胞，胰酶消化后傳于T75瓶，于37℃無γ-干擾素條件下培養(yǎng)

2、10 d使其分化，此時(shí)觀察足細(xì)胞生長分化形態(tài)，若狀態(tài)良好時(shí)可用于試驗(yàn)。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組：將足細(xì)胞分為六組：正常對(duì)照組，阿霉素處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時(shí))，ACTH處理組(濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h), ZCL278處理組(50uM ZCL278處理1h),阿霉素+ACTH處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時(shí)后再分別加入濃度為1ng/ml、10ng/

3、ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h),阿霉素+ACTH+ZCL278處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時(shí)后再分別加入濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h，然后再加入50uM ZCL278分別處理1h)。
　　3.檢測(cè)指標(biāo)：采用RT-PCR方法檢測(cè)nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達(dá)；采用Western-blotting技術(shù)對(duì)nephrin、po

4、docin、actin以及cdc42蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：與正常對(duì)照組對(duì)比，阿霉素處理組nephrin和podocin的mRNA及蛋白表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而cdc42和actin的mRNA及蛋白表達(dá)未有明顯降低。與正常對(duì)照組對(duì)比，ZCL278處理組cdc42和actin的mRNA及蛋白表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而nephrin和podocin的mRNA及蛋白表達(dá)未有明顯

5、降低。與正常對(duì)照組對(duì)比，中濃度ACTH處理組nephrin和podocin的mRNA及蛋白表達(dá)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而cdc42和actin的mRNA及蛋白表達(dá)未有明顯升高。與低濃度和高濃度ACTH處理組相比，中濃度ACTH處理組nephrin和podocin的mRNA及蛋白表達(dá)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與阿霉素處理組相比，中濃度阿霉素+ACTH處理組nephrin和podocin的mRNA及蛋白表達(dá)

6、明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而cdc42和actin的mRNA及蛋白表達(dá)未有明顯升高。與正常對(duì)照組對(duì)比，阿霉素+ACTH+ZCL278處理組cdc42和actin的mRNA及蛋白表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：足細(xì)胞的nephrin和podocin結(jié)構(gòu)蛋白是ACTH保護(hù)足細(xì)胞的的基礎(chǔ)，但這種保護(hù)作用并不是通過影響cdc42信號(hào)蛋白來表現(xiàn)的，但相信我們的研究能對(duì)未來的相關(guān)研究提供一些思