健脾養(yǎng)正消癥方作用胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究健脾養(yǎng)正消癥方對人胃癌細(xì)胞株MGC-803侵襲遷移粘附的影響，試圖闡述其相關(guān)機(jī)制可能由于通過影響轉(zhuǎn)錄因子Snail來調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生從而發(fā)揮作用，抑制胃癌的轉(zhuǎn)移。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　1.采用MTT法來觀察健脾養(yǎng)正消癥方體外作用于胃癌細(xì)胞株MGC-803在24h、48h、72h對胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用，并選擇出最佳的給藥濃度，確定實(shí)驗(yàn)分組。
　　2.通過劃痕實(shí)驗(yàn)，觀察健脾養(yǎng)正消癥方對于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

2、及未轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞株MGC-803細(xì)胞的遷移能力影響，分組進(jìn)行比較。
　　3.選擇Transwell小室的實(shí)驗(yàn)方法，從而觀察健脾養(yǎng)正消癥方對于未經(jīng)過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染后的胃癌細(xì)胞株MGC-803侵襲能力的影響。
　　4.通過CCK8法檢測健脾養(yǎng)正消癥方對未轉(zhuǎn)染及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的胃癌細(xì)胞株MGC-803粘附能力的影響。
　　5.Western blot方法檢測健脾養(yǎng)正消癥方對于胃癌細(xì)胞MGC-803 EMT相關(guān)蛋白(E-Cadh

3、erin、N-Cadherin、Vimentin、Snail、slug)的影響。
　　6.采用RT-PCR健脾養(yǎng)正消癥方作用過后的胃癌細(xì)胞MGC-803中EMT相關(guān)的基因表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.2mg/ml濃度的健脾養(yǎng)正消癥方作用胃癌細(xì)胞株MGC-80324h后，胃癌細(xì)胞死亡約50％。
　　2.空白組與質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組比較，發(fā)現(xiàn)Snail質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞侵襲、遷移、粘附能力較空白組增強(qiáng)，siRNA轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞侵襲、

4、遷移及粘附能力有所下降。
　　3.健脾養(yǎng)正消癥方作用轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞后，該復(fù)方能夠抑制空白胃癌細(xì)胞的侵襲、遷移、粘附能力，并且能夠削弱Snail轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的侵襲遷移及粘附能力，其抑制能力與復(fù)方濃度呈正相關(guān)。
　　4.藥物作用于轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)的胃癌細(xì)胞MGC-80324h后，通過RT-PCR及Western Blot方法，健脾養(yǎng)正消癥方能夠調(diào)節(jié)EMT相關(guān)基因及蛋白。
　　結(jié)論:
　　健脾養(yǎng)正消癥方能夠有效的抑制胃