DHA對(duì)果糖誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：果糖攝入增多可引起肝臟內(nèi)脂質(zhì)蓄積，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟發(fā)生脂肪變性。有研究發(fā)現(xiàn)ω-3多不飽和脂肪酸(如DHA)對(duì)肝臟的脂肪變性有一定的保護(hù)作用。本研究擬以原代肝臟細(xì)胞體外培養(yǎng)為研究體系，探討DHA是否能夠改善果糖誘導(dǎo)的肝臟脂質(zhì)蓄積及可能的分子機(jī)制。
　　方法：選用正常雄性的C57 BL/6J小鼠，采用肝臟肝門(mén)靜脈灌流的方法，獲得肝臟細(xì)胞；得到的肝臟細(xì)胞分別用果糖、果糖和DHA、DHA、PBA和果糖、TM處理細(xì)胞24小時(shí)以后進(jìn)行油紅O

2、染色觀察細(xì)胞內(nèi)紅染脂滴蓄積的情況；Real-time PCR檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)基因表達(dá)水平；Western blotting檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi) ACC、SREBP、ACOX1、GRP78/BIP、IRE、p-IRE蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：油紅O染色結(jié)果表明原代肝細(xì)胞在果糖和衣霉素作用下發(fā)生明顯的脂質(zhì)蓄積，在DHA的作用下細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積明顯減少，而果糖和DHA復(fù)合處理組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積也明顯減輕，同時(shí)PBA預(yù)處理后再加入果糖干預(yù)肝細(xì)胞脂質(zhì)蓄

3、積明顯減輕；Real-time PCR結(jié)果顯示原代肝細(xì)胞在果糖和衣霉素作用下FAS、ACC、SREBP、GRP78的mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯上調(diào)；DHA處理組FAS、ACC、SREBP、GRP78的mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組無(wú)明顯變化，CPT1α、ACOX1明顯上調(diào)；果糖和DHA復(fù)合處理組FAS、ACC、GRP78的mRNA表達(dá)水平較果糖組明顯下調(diào)，CPT1α、ACOX1明顯上調(diào)；果糖和PBA復(fù)合處理組FAS、ACC、SREBP、GR

4、P78的mRNA表達(dá)水平較果糖組明顯下調(diào)，CPT1α、ACOX1無(wú)明顯變化。Western blotting結(jié)果提示原代肝細(xì)胞在果糖和衣霉素作用下ACC、SREBP、GRP78/BIP、IRE和p-IRE蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著增強(qiáng)；DHA處理組ACC、SREBP、GRP78/BIP、IRE和p-IRE蛋白表達(dá)較對(duì)照組無(wú)明顯變化，ACOX1蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)；果糖和DHA復(fù)合處理組與果糖和PBA復(fù)合處理組ACC、SREBP、GRP78/BIP