NO-1886對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積和IL-6表達(dá)的影響及其可能機(jī)制探討.pdf

1、研究背景:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是一種以慢性炎癥為主要特征的心血管疾病。由單核/巨噬細(xì)胞來源的泡沫細(xì)胞的形成參與了脂質(zhì)條紋、纖維斑塊、粥樣斑塊及有并發(fā)病變的病灶,這幾個(gè)基本的AS病理過程,在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義。
　　脂蛋白脂酶(LPL)是血漿甘油三酯代謝的限速酶,研究發(fā)現(xiàn)不同部位表達(dá)的LPL對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用并不完全相同。脂肪和肌肉組織來源的LPL可以有效的脂解富含甘油三酯的脂蛋白

2、,提高餐后血漿脂蛋白的清除率,并通過促進(jìn)HDL的生成達(dá)到抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。相反動(dòng)脈血管局部表達(dá)的LPL,尤其是巨噬細(xì)胞表達(dá)的LPL則可能通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的形成,而被認(rèn)為具有致動(dòng)脈粥樣硬化的作用。并且近來有研究發(fā)現(xiàn)人巨噬細(xì)胞LPL表達(dá)被抑制后,其炎癥因子的表達(dá)以及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積也會(huì)相應(yīng)減少。
　　NO-1886是一種LPL的激活劑,研究報(bào)道它可以提高大鼠脂肪組織、心肌和骨骼肌中LPL mRNA的表達(dá)和活性,以及血漿肝

3、素化后LPL的活性,從而降低了血漿TG水平升高了血漿HDL-C的水平。但NO-1886是否也能夠提高單核/巨噬細(xì)胞中LPL mRNA的表達(dá)和活性呢?如果NO-1886能上調(diào)單核/巨噬細(xì)胞LPL的表達(dá),那么其對(duì)該細(xì)胞脂質(zhì)蓄積和IL-6的表達(dá)又有怎樣的影響?NO-1886是否通過激活THP-1巨噬細(xì)胞PPARγ的表達(dá)來上調(diào)LPL的表達(dá)和活性?關(guān)于以上問題目前尚未見報(bào)道,因此本實(shí)驗(yàn)擬通過研究NO-1886對(duì)人單核/巨噬細(xì)胞THP-1的作用,對(duì)

4、以上問題進(jìn)行了初步探討。
　　目的:觀察NO-1886對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞LPL的表達(dá)和活性的影響;進(jìn)一步研究其對(duì)該細(xì)胞脂質(zhì)蓄積和IL-6表達(dá)的影響;NO-1886對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞PPARγ表達(dá)的影響;PPARγ拮抗劑GW9662對(duì)NO-1886誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞LPL的表達(dá)和活性改變的影響。
　　方法:在每次實(shí)驗(yàn)前用160nmol/L佛波酯孵育THP-1細(xì)胞24h,使其誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞,換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)后加處

5、理因素。
　　1.用10uM/L的NO-1886與THP-1巨噬細(xì)胞孵育不同時(shí)間,即(0h、12h、6h、24h、36h、48h),用不同濃度的NO-1886(0μM/L、2.5μM/L、5μM/L、10μM/L、20μM/L),5μLDMSO與THP-1巨噬細(xì)胞共孵育24h,采用RT-PCR和LPL活性檢測(cè)試劑盒分別檢測(cè)各組細(xì)胞LPL mRNA的表達(dá)和活性。
　　2.分別用50mg/L oxLDL、10μM/L NO-18

6、86+50mg/L oxLDL共孵育THP-1巨噬細(xì)胞24h,以空白組做對(duì)照,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況,高效液相色譜分析法檢測(cè)各組細(xì)胞總膽固醇蓄積情況。50mg/L oxLDL和不同濃度的NO-1886(0μM/L、2.5μM/L、5μM/L、10μM/L)、5μLDMSO與THP-1巨噬細(xì)胞共孵育24h,RT-PCR、ELISA、Westernblot分別檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞IL-6的表達(dá)情況。
　　3.用

7、不同濃度的NO-1886(0μM/L、2.5μM/L、5μM/L、10μM/L、20μM/L)5μLDMSO與THP-1巨噬細(xì)胞共孵育24h,RT-PCR、Westernblot分別檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞PPARγ的表達(dá)。分別用10μM/LNO-1886、10μM/LGW9662和10μM/LGW9662+10μM/LNO-1886處理細(xì)胞24h,空白組和DMSO組做對(duì)照, RT-PCR和LPL活性檢測(cè)試劑盒分別檢測(cè)各組細(xì)胞LPL的表達(dá)

8、和活性。
　　結(jié)果:1. NO-1886可呈劑量和時(shí)間依賴性上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞LPL mRNA的表達(dá)和活性。
　　2. NO-1886對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞IL-6蛋白和mRAN的表達(dá)以及培養(yǎng)基中IL-6的濃度沒有明顯影響。但油紅O染色顯示oxLDL+NO-1886組較oxLDL組,細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯增多增大。高效液相色譜分析法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇,各處理組細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯與總膽固醇的比值為:41％、60%、72%。<

9、br>　　3. NO-1886可呈劑量依賴性上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞PPAR-γ mRNA和蛋白的表達(dá)。而PPAR-γ拮抗劑GW9662可以抑制NO-1886對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞LPL mRNA的表達(dá)和活性的上調(diào)作用。
　　結(jié)論:1.NO-1886可呈濃度和時(shí)間依賴性上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞LPL mRNA的表達(dá)和活性。
　　2.NO-1886對(duì) THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞 IL-6蛋白和mRAN的表達(dá)以及培養(yǎng)基中IL-6的