骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對脂多糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷的影響及可能機制.pdf

1、目的：觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone mesenehymal stem cell, BMSC）對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷的影響，探討B(tài)MSC保護損傷足細(xì)胞的可能機制。
　　方法：全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)BALB/C小鼠股骨的BMSC。免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定腎小球足細(xì)胞。實驗分為4組：正常條件培養(yǎng)的足細(xì)胞（Co ntro l組）、足細(xì)胞與BMSC共培養(yǎng)（BMSC組）、LPS誘導(dǎo)的足細(xì)胞（LPS

2、組）、LPS誘導(dǎo)的足細(xì)胞與BMSC共培養(yǎng)（LPS+BMSC組）。各組在實驗條件干預(yù)24小時后，倒置相差顯微鏡下觀察足細(xì)胞的形態(tài)；RT-PCR測定足細(xì)胞nephrin、CD2AP、synaptopodin和TRPC6 mRNA的表達(dá)；蛋白免疫印跡雜交（Western Blot）測定足細(xì)胞的nephrin、CD2AP、synaptopodin、TRPC6蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、流式細(xì)胞儀顯示體外分離培養(yǎng)的第3代小鼠BMSC表面抗原

3、CD44陽性細(xì)胞表達(dá)率98.7％±0.9%，CD90陽性細(xì)胞表達(dá)率98.1%±1.4%，CD29陽性細(xì)胞表達(dá)率96.1%±2.4%，而CD11b/c陽性細(xì)胞表達(dá)率14.7%±0.6%，CD34陽性細(xì)胞表達(dá)率1.98%±0.5%。2、免疫細(xì)胞化學(xué)染色，未分化的足細(xì)胞，細(xì)胞核較小，呈細(xì)橢圓形，胞質(zhì)中不表達(dá)足細(xì)胞特異性骨架蛋白synap topod in；分化成熟的足細(xì)胞，細(xì)胞核變大變圓，胞質(zhì)中可見大量表達(dá) syna ptopod in。3、

4、LPS組的足細(xì)胞胞體皺縮，細(xì)胞內(nèi)砂礫樣物質(zhì)明顯增多，空泡形成；LPS+BMSC組足細(xì)胞則仍可見原有細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞皺縮不明顯，細(xì)胞內(nèi)砂礫物質(zhì)和空泡生成減少。4、與LPS組比較，LPS+BMSC組nephrin、CD2AP、synaptopodin mRNA的表達(dá)水平均明顯升高（P<0.05），TRPC6 mRNA的表達(dá)水平顯著下降（P<0.05）。5、與LPS組比較，LPS+BMSC組nephrin、CD2AP和synaptopodin蛋