乙酰輔酶A羧化酶調(diào)控上皮性卵巢癌耐藥、增殖及轉(zhuǎn)移相關(guān)通路機制研究.pdf

1、研究目的：
　　通過慢病毒干擾卵巢上皮腫瘤細胞中ACC的表達，以及通過TOFA調(diào)節(jié)ACC的活性，觀察卵巢癌耐藥性、侵襲性的變化，同時檢測PI3K/Akt通路的表達水平，找出二者的關(guān)系，揭示卵巢上皮性腫瘤中ACC表達量/活性與腫瘤耐藥和侵襲的關(guān)系，為臨床開發(fā)卵巢癌的治療藥物提供新的思路。
　　研究方法：
　　1．通過PCR及Westernblot技術(shù)驗證ACC在A2780及A2780泰素耐藥株A2780T中的本底表達。<

2、br>　　2．通過生物信息學方法，檢索干擾ACC基因表達的最優(yōu)序列
　　3．構(gòu)建ACC真核表達質(zhì)粒，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染卵巢上皮癌細胞A2780，摸索最佳干擾序列。
　　4.化學合成載有ACC siRNA的慢病毒包裝，并導入A2780-Taxol細胞
　　5.應(yīng)用MTT和流式細胞術(shù)（FCM），分別檢測細胞在高表達ACC和不表達ACC兩種情況下的增殖、細胞周期差異
　　6.采用Western Blot方法檢測A2780T細胞

3、在TOFA處理下AAC、mTOR、Akt磷酸化及非磷酸化狀態(tài)的表達,以及細胞在TOFA處理后與對照組的耐藥性差異。
　　研究結(jié)果：
　　1.在A2780及A2780泰素耐藥株中，檢測到ACC的表達量差異，A2780泰素耐藥株中ACC表達顯著高于A2780野生型。
　　2.構(gòu)建成功裝載有干擾ACC siRNA的慢病毒，并成功轉(zhuǎn)入A2780T細胞，建立了A2780T-siACC的新的低表達ACC的細胞株及其對照組。

4、　　3.研究驗證了TOFA是通過通過磷酸化ACC導致其失活，從而導致細胞的耐藥性降低及細胞周期停滯。TOFA不直接引起細胞凋亡，而需要與化療藥物協(xié)同作用。
　　4.ACC表達的干擾可以引起A2780T細胞耐藥性的顯著降低。同時，通過TOFA磷酸化ACC導致其失活后，亦可以達到同樣的效果。
　　5.在TOFA處理的細胞中，通過westernblot檢測PI3K/Akt活通路性相關(guān)的p-mTOR及p-Akt表達均明顯下降，提示A

5、CC的磷酸化可能通過影響PI3K/Akt通路的活性從而影響細胞的耐藥性。
　　研究結(jié)論：
　　1.細胞內(nèi)ACC的表達缺失及活性的抑制均可以導致細胞周期停滯、細胞對化療藥物的耐藥性的降低。
　　2.TOFA通過磷酸化ACC從而影響其活性。TOFA對細胞無直接殺傷作用，但可以協(xié)同化療藥物殺傷腫瘤細胞，對正常細胞沒有明顯影響，是一種潛在的卵巢癌的治療藥物
　　3.ACC可能是通過其磷酸化而影響PI3K/Akt通路的活性