ETV1調(diào)控因子CBP-p300在胃腸道間質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究.pdf

1、背景：
　　胃腸道間質(zhì)瘤是最常見的間質(zhì)源性的消化道腫瘤，該腫瘤主要分子特點是存在能夠異常激活KIT與PDGFRA的基因突變。雖然病例的總體生存率隨著酪氨酸激酶抑制劑的問世得到了很大的改善，但由于治療過程中會產(chǎn)生KIT或PDGFRA的繼發(fā)性突變，大多數(shù)病例最終仍然會發(fā)展到耐藥階段，造成病情的惡化。近來的研究表明，組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶（histone acetyltransferase，HAT）CBP及p300的功能與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展

2、密切相關(guān)，而應(yīng)用針對CBP和p300的靶向小分子抑制劑則可以抑制某些實體瘤細胞的增殖并且誘導(dǎo)腫瘤細胞發(fā)生凋亡。此外，另有報道顯示，CBP/p300可以在體外細胞模型中直接作用于一種轉(zhuǎn)錄因子ETV1，通過催化ETV1的乙?；瘡亩龠M其的轉(zhuǎn)錄活性;而在GIST組織中，ETV1則有著特異性的表達，并且被認為是一種與GIST生存相關(guān)的特殊因子。因此，轉(zhuǎn)錄后乙?；揎椩贕IST起源與成瘤過程中的潛在作用已逐漸受到重視。
　　目的：
　

3、　明確ETV1在GIST組織與細胞中的表達特征及潛在生物學(xué)作用，進而探究其調(diào)控因子CBP/p300在GISTs成瘤和腫瘤細胞增殖過程中的作用，并評估它們在GIST靶向治療中的應(yīng)用前景。對選擇性CBP/p300抑制劑C646的潛在治療作用進了探索，并對具體的分子機制進行了深入的研究。
　　方法：
　　通過向GIST細胞轉(zhuǎn)染特異的小干擾RNA序列從而下調(diào)細胞中的ETV1、CBP以及p300的表達。GIST腫瘤以及瘤旁組織中的c-

4、Kit與ETV1的表達由免疫組織化學(xué)染色法檢測。用濃度遞增的C646對腫瘤細胞GIST882進行培養(yǎng)，同時設(shè)置了與低濃度的伊馬替尼聯(lián)合用藥組。運用實時熒光定量PCR以及Western blot分析技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染小干擾RNA后ETV1、CBP和p300分別在mRNA水平及蛋白水平的表達情況。
　　GIST細胞的細胞活力由CCK-8分析法來測定。細胞凋亡的檢測則由caspase活性分析以及AnnexinⅤ/PI染色后的流式細胞儀分析完成

5、。腫瘤細胞經(jīng)PI單染后由流式細胞儀分析以檢測細胞周期改變。與這些細胞生物學(xué)活性及功能變化相關(guān)的信號通路的分子改變是由Western blot技術(shù)檢測分析的。
　　結(jié)果：
　　GIST組織和細胞(GIST882)中均有ETV1的特征性表達，而下調(diào)GIST細胞的ETV1表達則將抑制腫瘤細胞的增殖并且誘發(fā)細胞凋亡。在轉(zhuǎn)錄水平上抑制CBP的表達可以阻止GIST882的細胞增殖，而p300的表達下調(diào)對腫瘤細胞增殖無明顯抑制作用。干擾C

6、BP與p300的表達均能激活腫瘤細胞的caspase活性，進而誘導(dǎo)細胞凋亡。GIST細胞的CBP以及p300的表達下調(diào)后，ETV1的表達下降，KIT的磷酸化受到抑制，并且均能通過激活線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)細胞凋亡。CBP表達下調(diào)會導(dǎo)致增殖相關(guān)的ERK1/2失活并伴隨JNK的磷酸化水平上調(diào)，而在p300干擾組中并未觀察到上述信號通路的功能改變，因此與p300相比，CBP在腫瘤細胞的增殖和生存過程中起到了更為重要的作用。應(yīng)用CBP/p300的選

7、擇性抑制劑C646可以有效抑制GIST細胞的增殖。經(jīng)過C646的處理后，腫瘤細胞出現(xiàn)細胞凋亡以及細胞周期阻滯，表明細胞凋亡的誘導(dǎo)以及細胞周期的阻滯能夠促進增殖抑制作用。此外，與CBP干擾組的結(jié)果類似，C646可以通過抑制KIT的激活進而阻斷下游信號通路激活與轉(zhuǎn)導(dǎo)。
　　結(jié)論：
　　下調(diào)GIST細胞中的CBP可以誘導(dǎo)細胞凋亡進而抑制腫瘤細胞活力，而干擾p300表達并不能有效抑制腫瘤細胞的增殖。因此，與p300相比， CBP是更

8、具靶向優(yōu)勢的治療靶點。引起上述的GIST腫瘤抑制作用的分子機制涉及ETV1表達的下調(diào)、腫瘤細胞增殖相關(guān)的KIT及其下游效應(yīng)因子ERK1/2和Akt的功能失活、JNK以及線粒體凋亡途徑的參與等。選擇性乙酰基轉(zhuǎn)移酶抑制劑C646可以抑制GIST細胞的增殖并誘導(dǎo)細胞凋亡，這種作用主要是通過抑制CBP的功能而實現(xiàn)的。綜上所述，對于GIST分子治療而言，CBP是更具靶向優(yōu)勢的潛在治療靶點，而應(yīng)用選擇性組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶抑制劑則有望成為今后靶向治療