糙葉敗醬總木脂素抑制K562細胞增殖及誘導凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:研究和觀察糙葉敗醬提取物糙葉敗醬總木脂素對K562細胞的作用，初步探討糙葉敗醬總木脂素誘導K562細胞凋亡的分子機制。 方法: (1)采用四甲基偶氮唑鹽比色法(monotetrazolium test，MTT)測定糙葉敗醬總木脂素對K562細胞生長的影響。 (2)采用透射電鏡觀察經(jīng)糙葉敗醬總木脂素作用后，K562細胞形態(tài)變化。 (3)采用流式細胞儀，利用碘化丙啶(propidineiodide，PI

2、)單染法進行DNA含量分析，檢測經(jīng)糙葉敗醬總木脂素作用后K562細胞凋亡率；并利用早期凋亡試劑盒Annexin V-FITC和PI雙染法測定糙葉敗醬總木脂素對K562細胞生長的作用。 (4)采用免疫細胞化學SABC法觀察糙葉敗醬總木脂素對K562細胞凋亡相關蛋白Caspase-3表達的影響。 (5)采用激光掃描共聚焦顯微鏡(LCSM)檢測糙葉敗醬總木脂素對K562細胞線粒體膜電位的影響。 結果: (1)M

3、TT測定結果表明糙葉敗醬總木脂素對K562細胞生長有明顯的抑制作用，抑制作用隨藥物濃度增高及作用時間延長而有加強趨勢，細胞經(jīng)400μg/mL糙葉敗醬總木脂素作用96h，抑制率為99.38﹪，IC<,50>為21.16μg/mL，與陰性對照組相比較有顯著性差異(P<0.01)。 (2)電鏡下觀察到經(jīng)400μg/mL糙葉敗醬總木脂素作用48h后，一部分K562細胞體積變小，胞漿濃縮，胞核染色質(zhì)聚集或邊集，核碎裂，凋亡小體形成，呈典型

4、的凋亡形態(tài)特征。 (3)流式細胞儀檢測：通過PI單染，檢測到經(jīng)400μ g/mL糙葉敗醬總木脂素作用K562細胞48h后，產(chǎn)生明顯的亞二倍體峰，細胞被明顯阻滯在G<,1>期，處于S期、G<,2>期細胞明顯減少。細胞凋亡率為19.1﹪±2.3，與陰性對照組相比較有顯著性差異(P<0.05)。通過Annexin V-FITC和PI雙染，檢測到經(jīng)400μg/mL糙葉敗醬總木脂素作用K562細胞72h，凋亡細胞占22.1﹪±1.4，與陰

5、性對照組相比較有顯著性差異(P<0.05)。 (4)SABC法檢測結果表明不同濃度糙葉敗醬總木脂素作用于K562細胞24h、48h、72h、96h，K562細胞Caspase-3蛋白的IOD值均增高，與陰性對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。上調(diào)Caspase-3蛋白表達作用隨藥物濃度增高，及作用時間延長而有加強趨勢。 (5)LSCM圖像及數(shù)據(jù)處理結果顯示經(jīng)不同濃度糙葉敗醬總木脂素作用K562細胞48h，較陰性對照組