糙葉敗醬總木脂素抑制K562細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究和觀察糙葉敗醬提取物糙葉敗醬總木脂素對(duì)K562細(xì)胞的作用，初步探討糙葉敗醬總木脂素誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。 方法: (1)采用四甲基偶氮唑鹽比色法(monotetrazolium test，MTT)測(cè)定糙葉敗醬總木脂素對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 (2)采用透射電鏡觀察經(jīng)糙葉敗醬總木脂素作用后，K562細(xì)胞形態(tài)變化。 (3)采用流式細(xì)胞儀，利用碘化丙啶(propidineiodide，PI

2、)單染法進(jìn)行DNA含量分析，檢測(cè)經(jīng)糙葉敗醬總木脂素作用后K562細(xì)胞凋亡率；并利用早期凋亡試劑盒Annexin V-FITC和PI雙染法測(cè)定糙葉敗醬總木脂素對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。 (4)采用免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法觀察糙葉敗醬總木脂素對(duì)K562細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3表達(dá)的影響。 (5)采用激光掃描共聚焦顯微鏡(LCSM)檢測(cè)糙葉敗醬總木脂素對(duì)K562細(xì)胞線粒體膜電位的影響。 結(jié)果: (1)M

3、TT測(cè)定結(jié)果表明糙葉敗醬總木脂素對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，抑制作用隨藥物濃度增高及作用時(shí)間延長(zhǎng)而有加強(qiáng)趨勢(shì)，細(xì)胞經(jīng)400μg/mL糙葉敗醬總木脂素作用96h，抑制率為99.38﹪，IC<,50>為21.16μg/mL，與陰性對(duì)照組相比較有顯著性差異(P<0.01)。 (2)電鏡下觀察到經(jīng)400μg/mL糙葉敗醬總木脂素作用48h后，一部分K562細(xì)胞體積變小，胞漿濃縮，胞核染色質(zhì)聚集或邊集，核碎裂，凋亡小體形成，呈典型

4、的凋亡形態(tài)特征。 (3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)：通過(guò)PI單染，檢測(cè)到經(jīng)400μ g/mL糙葉敗醬總木脂素作用K562細(xì)胞48h后，產(chǎn)生明顯的亞二倍體峰，細(xì)胞被明顯阻滯在G<,1>期，處于S期、G<,2>期細(xì)胞明顯減少。細(xì)胞凋亡率為19.1﹪±2.3，與陰性對(duì)照組相比較有顯著性差異(P<0.05)。通過(guò)Annexin V-FITC和PI雙染，檢測(cè)到經(jīng)400μg/mL糙葉敗醬總木脂素作用K562細(xì)胞72h，凋亡細(xì)胞占22.1﹪±1.4，與陰

5、性對(duì)照組相比較有顯著性差異(P<0.05)。 (4)SABC法檢測(cè)結(jié)果表明不同濃度糙葉敗醬總木脂素作用于K562細(xì)胞24h、48h、72h、96h，K562細(xì)胞Caspase-3蛋白的IOD值均增高，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。上調(diào)Caspase-3蛋白表達(dá)作用隨藥物濃度增高，及作用時(shí)間延長(zhǎng)而有加強(qiáng)趨勢(shì)。 (5)LSCM圖像及數(shù)據(jù)處理結(jié)果顯示經(jīng)不同濃度糙葉敗醬總木脂素作用K562細(xì)胞48h，較陰性對(duì)照組