染色體驅(qū)動蛋白KIF4A通過與細(xì)胞膜蛋白supervillin的相互作用影響胃癌細(xì)胞的遷移侵襲.pdf

1、胃癌是全國范圍內(nèi)致死率最高的惡性疾病之一，胃癌轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致其高致死率的主要因素。目前對于胃癌發(fā)病機(jī)制及其治療方面已有廣泛研究，但是對于胃癌依舊沒有很好的治療方法，胃癌仍然是威脅人類生命健康的重大疾病之一。為了探討臨床胃癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，尋找潛在的有效治療胃癌的分子靶點(diǎn)，我們在前期工作基礎(chǔ)上，深入研究了驅(qū)動蛋白分子KIF4A對胃癌細(xì)胞遷移侵襲的調(diào)控。
　　研究表明，驅(qū)動蛋白分子KIF4A是保證細(xì)胞正常分裂的一個關(guān)鍵蛋白，KIF4A的表

2、達(dá)異常會導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。然而KIF4A參與調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移過程鮮見報(bào)道，我們深入研究了KIF4A蛋白分子對胃癌細(xì)胞的遷移侵襲的調(diào)控作用，進(jìn)而闡明KIF4A在調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的分子作用機(jī)制。
　　Supervillin(SVIL)是一種與F-actin結(jié)合的膜蛋白，為外周膜蛋白，普遍表達(dá)于人體各組織，有研究表明，SVIL在腫瘤細(xì)胞的侵襲過程中起到一定的作用，并且通過酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)證明了其在細(xì)胞內(nèi)能與KIF4A相結(jié)合，因此猜想是否

3、KIF4A調(diào)控腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程的分子機(jī)制與SVIL有關(guān)，并對這一假設(shè)做了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　　本研究工作從以下幾個方面進(jìn)行展開:
　　1.我們利用脂質(zhì)體2000分別轉(zhuǎn)染pGPU6-GFP-KIF4A和pGPU6-GFP-NC質(zhì)粒以及pEGFP-C1、pEGFP-KIF4A和pEGFP-SVIL的質(zhì)粒于SGC-7901細(xì)胞中，利用G418進(jìn)行篩選，構(gòu)建出了KIF4A低表達(dá)SGC穩(wěn)篩細(xì)胞株、KIF4A高表達(dá)SGC穩(wěn)篩細(xì)胞株、SV

4、IL高表達(dá)SGC穩(wěn)篩細(xì)胞株以及兩個對照細(xì)胞株，并通過Western Blot和免疫熒光染色鑒定這幾個穩(wěn)篩的細(xì)胞株。
　　2.運(yùn)用KIF4A低表達(dá)胃癌細(xì)胞株和KIF4A高表達(dá)胃癌細(xì)胞株分別進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)，觀察KIF4A對胃癌細(xì)胞SGC-7901遷移的影響。
　　3.對KIF4A低表達(dá)胃癌細(xì)胞株和KIF4A高表達(dá)胃癌細(xì)胞株進(jìn)行vinculin染色并進(jìn)行計(jì)數(shù)，應(yīng)用Origin8.0軟件作圖，觀察KIF4A對胃