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文檔簡介
1、該研究利用從該省辣椒地方品種資源中篩選出的抗病品種為材料,在優(yōu)化了其RNA提取方法的基礎上,構(gòu)建辣椒葉片響應UV輻射而表達的cDNA文庫,主要結(jié)果如下:(1)以經(jīng)過UV輻射處理后的辣椒葉片為研究材料,優(yōu)化了辣椒RNA提取方法,在該方法下所提取的RNA質(zhì)量,能夠很好的滿足構(gòu)建文庫的要求.(2)利用MMLV反轉(zhuǎn)錄酶把總RNA中的mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA,用特異引物進行LD-PCR擴增合成雙鏈cDNA;用CHROMA SPIN-400Colu
2、mn對cDNA進行分級分離,去除小于500bp的cDNA片段;用帶有粘性末端的雙鏈cDNA與λTriplEx2載體連接,利用λ噬菌體包裝蛋白對合成的雙鏈cDNA進行體外包裝,包裝產(chǎn)物侵染E.coli XL-Blue獲得cDNA 文庫.該cDNA文庫的滴度為1.191×106,克隆數(shù)為1.112×106,擴增后的滴度為1.532×1010,插入片段平均大小在1kb左右,藍白斑篩選證實其重組率大于80%.同時,由于反轉(zhuǎn)錄過程中采用附加序列的
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