含有Hygromycin抗性的HBV穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系構(gòu)建及鑒定.pdf

1、目的：構(gòu)建含有Hygromycin抗性的穩(wěn)定表達(dá)HBV的細(xì)胞研究模型。
　　方法：構(gòu)建pSEH-Flag-HBV重組質(zhì)粒，經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定，脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，Hygromycin篩選，ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液HBsAg、HBeAg的表達(dá)情況，選擇HBsAg、HBeAg表達(dá)量均高的細(xì)胞株進(jìn)行下一步的檢測(cè)，PCR、Southern blotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HBV DNA，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞HBx、Hygromyci

2、n基因mRNA的表達(dá)，Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞C蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建HBV全基因克隆質(zhì)粒pSEH-flag-HBV，轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后，培養(yǎng)液上清HBsAg，HBeAg陽(yáng)性，Western blotting檢測(cè)HBc在蛋白水平有表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)到HBx、Hygromycin在mRNA水平有表達(dá)，Southern blotting驗(yàn)證了HepG2細(xì)胞基因組中有HBV片段的單一整合。
　　結(jié)論：