HAT抑制劑Garcinol對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:乙?；揎検堑鞍踪|(zhì)翻譯后修飾(post-translationalmodification，PTM)的重要方式之一，可發(fā)生在組蛋白和多種炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，是調(diào)控炎癥相關(guān)基因表達(dá)的重要機(jī)制。乙?；揎検强赡娴模阴；腿ヒ阴；揎椃謩e由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(histoneacetyltransferases，HATs)和組蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases，HDACs)所催化。目前關(guān)于HDACs抑制劑對(duì)炎癥的調(diào)節(jié)效

2、應(yīng)已有較多研究，但HATs抑制劑是否也可影響炎癥的發(fā)生發(fā)展卻少有報(bào)道。Garcinol是常用的HATs抑制劑，本文在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)/右旋半乳糖胺(D-galactosamine，D-Gal)誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型中觀察了garcinol對(duì)肝損傷的調(diào)節(jié)效應(yīng)并初步探討了其可能的機(jī)制。
　　方法:雄性BALB/c小鼠腹腔注射LPS(10μg/kg)及D-Gal(700mg/kg)誘導(dǎo)急性爆發(fā)性肝

3、損傷，溶劑或不同劑量garcinol(2.5 mg/kg，5 mg/kg，10 mg/kg)在LPS/D-Gal處理前0.5 h經(jīng)腹腔注入。LPS/D-Ga1處理后1.5 h，小鼠經(jīng)麻醉后斷頸處死，采集血漿及肝組織樣本，ELISA法檢測(cè)各樣本中TNF-α和IL-6的水平。另一批小鼠在LPS/D-Gal處理后6h處死并采集血漿及肝組織樣本。采用化學(xué)顯色法檢測(cè)血漿中轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST水平、測(cè)肝組織中丙二醛(malondialdehyde，

4、MDA)含量及caspase-3，-8，-9活性;免疫印跡法檢測(cè)肝組織中p65，乙?；痯65，p53，乙?；痯53，激活型caspase-3，Bax及Bcl-2蛋白含量;肝組織經(jīng)福爾馬林固定后，常規(guī)HE染色觀察組織病理學(xué)改變，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)激活型caspase-3水平。
　　結(jié)果:研究發(fā)現(xiàn)HATs抑制劑garcinol可明顯減輕LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝損傷，garcinol對(duì)模型小鼠肝內(nèi)炎癥反應(yīng)無明

5、顯影響但可顯著抑制肝細(xì)胞凋亡。具體表現(xiàn)在:(1) Garcinol在2.5～10 mg/kg范圍內(nèi)能劑量依賴性抑制LPS/D-Gal誘導(dǎo)的血漿中ALT和AST的升高，這一效應(yīng)伴隨有模型小鼠肝組織內(nèi)MDA水平的降低及組織病理?yè)p傷的減輕;(2) LPS/D-Gal可誘導(dǎo)肝組織內(nèi)NF-κB p65亞單位上Lys310位點(diǎn)的乙酰化修飾，這可被garcinol所抑制，但garcinol對(duì)LPS/D-Gal誘導(dǎo)的促炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的

6、表達(dá)并無明顯影響;(3) TUNEL分析發(fā)現(xiàn)garcinol可顯著抑制LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡，這伴隨有肝組織內(nèi)激活型caspase-3水平的降低及caspase-3，-8，-9活性的下調(diào);(4) Garcinol也可明顯抑制LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝組織內(nèi)p53上Lys379位點(diǎn)的乙?；揎?、下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，但garcinol對(duì)抗凋亡蛋白Bcl-2的含量無明顯影響。
　　結(jié)論:本研究數(shù)據(jù)顯示HATs抑制劑g

7、arcinol對(duì)LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝損傷具有保護(hù)作用，這一保護(hù)效應(yīng)不伴隨有肝內(nèi)炎癥因子的表達(dá)降低，可能通過抑制p53的乙?；揎?、降低其活性，從而下調(diào)促凋亡蛋白Bax、抑制肝細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)及我們的實(shí)驗(yàn)資料，我們認(rèn)為乙酰化在炎癥反應(yīng)中具有多靶點(diǎn)、多樣化的復(fù)雜調(diào)節(jié)作用，其對(duì)炎癥總體結(jié)局的影響還存在許多尚未揭示的新規(guī)律，有待進(jìn)一步的深入細(xì)致研究。此外，HATs抑制劑在爆發(fā)性肝炎中通過抑制凋亡而發(fā)揮保肝效應(yīng)，這對(duì)重癥肝炎防治