高尿酸血癥患者血漿microRNA表達(dá)譜分析及其靶基因預(yù)測(cè)研究.pdf

1、目的：通過(guò)microRNA基因芯片技術(shù)研究無(wú)癥狀高尿酸血癥患者與正常對(duì)照者血漿中microRNA的表達(dá)差異，并對(duì)差異表達(dá)的microRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，探討microRNA在高尿酸血癥中的作用機(jī)制。
　　方法：⑴選取4例無(wú)癥狀高尿酸血癥患者，4例正常對(duì)照者，取其外周血漿用Trizol法提取RNA，使用丹麥ExiqonTM公司的microRNA芯片檢測(cè)其血漿中microRNA表達(dá)譜，并篩選出顯著差異表達(dá)的microRNA。⑵選取1

2、個(gè)顯著上調(diào)的microRNA及2個(gè)顯著下調(diào)的microRNA在50例無(wú)癥狀高尿酸血癥患者及50例正常對(duì)照者中，使用RT-PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證。并對(duì)50例高尿酸血癥組及50例對(duì)照組進(jìn)行相關(guān)臨床資料分析。⑶通過(guò)搜索并匯總miranda數(shù)據(jù)庫(kù)、mirbase數(shù)據(jù)庫(kù)及targetcsan數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)篩選出的差異表達(dá)的microRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，得到特異表達(dá)于外周血中的靶基因；再通過(guò)GO及Pathway分析，對(duì)預(yù)測(cè)出的靶基因進(jìn)行相關(guān)分子功能分析。

3、
　　結(jié)果：①microRNA芯片表達(dá)結(jié)果顯示，共有263個(gè)microRNA在高尿酸血癥組與對(duì)照組間表達(dá)有變化，其中差異表達(dá)顯著的共有11個(gè)，上調(diào)的有5個(gè)，下調(diào)的有6個(gè)。②運(yùn)用RT-PCR技術(shù)，與對(duì)照組比較，高尿酸血癥組中miR-519d-3p表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；miR-374a-5p?miR-30c-5p表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），驗(yàn)證結(jié)果與microRNA芯片結(jié)果一致。③通過(guò)對(duì)顯著差異表

4、達(dá)的microRNA的靶基因預(yù)測(cè)及功能分析，發(fā)現(xiàn)這些異常表達(dá)的microRNA主要通過(guò)其相關(guān)靶基因影響TGF-β信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、細(xì)胞內(nèi)吞作用以及Notch信號(hào)通路等來(lái)發(fā)揮其作用。
　　結(jié)論：microRNA芯片技術(shù)是一種有效的高通量分析高尿酸血癥 microRNA表達(dá)譜的方法，相對(duì)于正常對(duì)照組，多種microRNA在高尿酸血癥患者外周血漿中出現(xiàn)差異表達(dá)，有可能成為高尿酸血癥的新的分子生物學(xué)標(biāo)志物并可能參與了高尿