COX3基因表達(dá)下調(diào)對(duì)GES-1和SGC7901細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：利用RNA干擾技術(shù)抑制COX3基因表達(dá)，觀察下調(diào)COX3對(duì)永生化胃粘膜上皮細(xì)胞系（GES-1）及胃癌細(xì)胞系（SGC7901）細(xì)胞增殖及凋亡的影響，初步探討COX3基因在胃癌發(fā)生中的作用。
　　方法：設(shè)計(jì)COX3基因的特異性siRNA序列，構(gòu)建pcDNA?6.2-GW/EmGFPmiR-COX3重組質(zhì)粒（siRNA-COX3質(zhì)粒），利用Lipofectamine2000分別轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒（陰性對(duì)照質(zhì)粒、siRNA-COX3質(zhì)粒）

2、至GES-1及SGC7901細(xì)胞，采用半定量RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后GES-1和SGC7901細(xì)胞內(nèi)COX3 mRNA的表達(dá)水平，建立COX3基因穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)分組為對(duì)照組（未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒）、空白組（陰性對(duì)照質(zhì)粒）、干擾組（轉(zhuǎn)染siRNA-COX3質(zhì)粒），運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)、平板克隆實(shí)驗(yàn)觀察COX3基因表達(dá)下調(diào)對(duì)GES-1及SGC7901細(xì)胞增殖的影響；利用超氧化物陰離子熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)02-，觀察COX3基因表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞內(nèi)活

3、性氧水平的變化；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，觀察COX3基因表達(dá)下調(diào)后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　重組干擾表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)測(cè)序比對(duì)，證實(shí)與原設(shè)計(jì)序列完全吻合，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至GES-1和SGC7901細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)COX3 mRNA，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染siRNA-COX3質(zhì)粒組細(xì)胞COX3 mRNA表達(dá)水平明顯減弱，從而建立COX3基因穩(wěn)定低表達(dá)的GES-1和SGC7901細(xì)胞系。
　　細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示，GES-1-s

4、iRNA-COX3組細(xì)胞生長(zhǎng)速度顯著高于對(duì)照組及空白組（p<0.05）；SGC7901-siRNA-COX3組細(xì)胞生長(zhǎng)速度與對(duì)照組及空白組比較，無(wú)明顯差異（p>0.05）。
　　平皿克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GES-1-siRNA-COX3組細(xì)胞集落形成力（28.29％）顯著高于對(duì)照組（18.22%）及空白組（20.43%）（p<0.05）；SGC7901-siRNA-COX3組細(xì)胞集落形成力（32.08%）顯著高于對(duì)照組（20.37%）

5、及空白組（21.84%）（p<0.05）。
　　超氧化物陰離子熒光探針檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，GES-1-siRNA-COX3及SGC7901組細(xì)胞內(nèi)O2-水平顯著高于對(duì)照組及空白組（p<0.05）。
　　細(xì)胞流式術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，與各自對(duì)照組（4.87%、4.56%）及空白組（9.57%、7.70%）比較，GES-1-siRNA-COX3（13.50%）和SGC7901-siRNA-COX3（10.09%）細(xì)胞組凋亡率增加，但是經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分