豬肉及產(chǎn)品中5種致病菌檢測芯片的保存和靈敏度研究.pdf

1、生物芯片是指包被在硅片、尼龍膜等固相支持物上的高密度的組織、細胞、蛋白質(zhì)、核酸、糖類以及其它生物組分的微點陣，芯片與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號即可實現(xiàn)對生物樣品的分析。生物芯片技術(shù)，被喻為21世紀生命科學(xué)的支撐技術(shù)，不僅用于細菌鑒定，在檢測基因的表達，研究生物體對逆境的反應(yīng)，研究生物體對光線的反應(yīng)、環(huán)境檢測、發(fā)現(xiàn)新基因等各個領(lǐng)域也有著廣闊的應(yīng)用前景。尤其是在動物產(chǎn)品的微生物檢驗中的應(yīng)用越來越廣泛。本文對進出口豬肉及其產(chǎn)品中沙門

2、氏菌、單增李斯特氏菌、金黃色葡萄球菌、空腸彎曲菌和大腸桿菌O157：H7檢測試劑盒芯片進行了保存試驗和靈敏度試驗，為進出口豬肉及其產(chǎn)品中此五種致病菌快速檢測的生物芯片應(yīng)用條件和有效期提供科學(xué)依據(jù)。 根據(jù)保存試驗設(shè)計，本試驗選取微生物檢測試劑盒芯片裸露放置于37℃環(huán)境中，用試劑盒所能檢測出的五種致病菌(大腸桿菌O157：H7、李斯特氏菌、沙門氏菌、空腸彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌)對芯片進行穩(wěn)定性檢測試驗。從零天起，每天取37℃保存的

3、芯片抽真空放于4℃保存，至第七天將所有4℃保存芯片取出，參照試劑盒說明，分別對五種致病菌進行基因組DNA提取、PCR擴增、PCR產(chǎn)物凝膠電泳，并將五種菌的PCR產(chǎn)物混合后與上述保存芯片進行雜交，42℃恒溫水浴雜交2小時，洗片后，芯片用晶芯(R)食源性致病微生物檢測分析系統(tǒng)進行掃描判讀。試驗共進行7天，相當于20℃下芯片保存10.5個月。試驗結(jié)果顯示，所有五種菌的檢測值與檢測限之間均存在顯著性差異，且信號強度大于檢測限，檢測結(jié)果均為陽性。

4、證明該微生物檢測試劑盒芯片能在37℃下穩(wěn)定保存7天，也就是說即在4℃條件下保持其穩(wěn)定性及活性的時間可達到10.5個月以上。 根據(jù)靈敏度試驗設(shè)計，采用人工培養(yǎng)的細菌進行檢測試驗，選取金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157：H7、沙門氏菌、李斯特氏菌和空腸彎曲桿菌，在通用培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯中接種，過夜培養(yǎng)16h，次日取菌液進行濃度測定，定量后的菌液取一定量提取基因組DNA，對基因組DNA進行定量檢測，分別取5ng、2.5ng、1ng、0.5n