XPA在肺癌組織中的表達(dá)及沉默XPA基因?qū)549-DDP化療敏感性的影響.pdf

1、支氣管肺癌是呼吸系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。在最近幾年，由于環(huán)境污染日益嚴(yán)重、吸煙人數(shù)和吸煙量逐漸增多，全世界范圍內(nèi)肺癌的發(fā)病率和病死率也在發(fā)生變化，正處在日益增長的過程中。有數(shù)據(jù)顯示，近年肺癌的發(fā)病率全世界范圍內(nèi)已經(jīng)約達(dá)萬分之七，居于惡性腫瘤發(fā)病率的首位，這與我國肺癌發(fā)病率的現(xiàn)狀是相吻合的。日前有資料顯示，約半數(shù)以上的癌癥患者死亡或無療效的原因與存在腫瘤耐藥有著直接或間接的關(guān)系。
　　 目前，化療方案中作為一線化療標(biāo)準(zhǔn)方案的仍然

2、是鉑類與第3代細(xì)胞毒性藥物的聯(lián)合化療方案。順鉑是多種晚期腫瘤使用最為廣泛的化療藥物，幾乎所有一線非小細(xì)胞肺癌化療都是與順鉑聯(lián)合應(yīng)用的方案。與最佳支持治療相比，含鉑類藥物的聯(lián)合化療方案能明顯改善和控制患者臨床癥狀，延長其中位生存期，提高生活質(zhì)量。然而由于癌細(xì)胞原發(fā)或繼發(fā)的鉑類耐藥而削弱順鉑的化療療效。由于肺癌的耐藥機(jī)制是極其復(fù)雜的，是由多因素、多因子參與的過程，因此對其進(jìn)行深入研究是具有重要意義的。
　　 耐順鉑人肺腺癌細(xì)胞株A5

3、49/DDP與人肺腺癌細(xì)胞株A549來自同一親本，具有相同的遺傳背景，兩者之間存在對順鉑敏感性和耐藥性的不同，因此采用這兩種細(xì)胞株進(jìn)行研究可避免取樣時造成的組織學(xué)差異，這樣才能對于所篩選的各基因之間的關(guān)系進(jìn)行全面、準(zhǔn)確地反映。也就是說，選擇耐順鉑人肺腺癌細(xì)胞株A549/DDP細(xì)胞為材料，可基本初步確定肺腺癌順鉑耐藥的相關(guān)候選基因，進(jìn)而深入探討肺癌的耐藥機(jī)制。
　　 核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repa

4、ir，NER)是細(xì)胞內(nèi)最重要的DNA損傷修復(fù)方式之一，但是如果增強(qiáng)DNA損傷的修復(fù)能力，則又易引起腫瘤細(xì)胞的耐藥。目前在NER與腫瘤發(fā)生及耐藥之間關(guān)系的研究方面取得了重大進(jìn)展。
　　 近幾年來，RNA干擾技術(shù)是在生命科學(xué)領(lǐng)域中新興的一門技術(shù)，這是一種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后沉默，產(chǎn)生的效應(yīng)類似于基因敲除，目前已成為進(jìn)行基因功能研究的一種重要手段。在篩選出的與肺癌耐藥相關(guān)的差異表達(dá)基因中，選擇表達(dá)明顯上調(diào)的基因，然后利用此技術(shù)封閉耐順鉑

5、人肺腺癌細(xì)胞A549/DDP細(xì)胞株中該特異基因的表達(dá)，通過逆轉(zhuǎn)其耐藥性為探索提高肺癌鉑類藥物化療效果的有效策略提供理論基礎(chǔ)。
　　 我們的研究通過揭示XPA在非小細(xì)胞肺癌對順鉑耐藥過程中的作用，進(jìn)一步闡述肺癌對化療的耐藥機(jī)制，探討沉默著色性干皮病A(XPA)基因表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞株順鉑化療敏感性的影響。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)法、實時定量PCR(qPCR)及免疫印跡(Western blot)方法檢測非小細(xì)

6、胞肺癌患者腫瘤組織中XPA-mRNA及其蛋白的表達(dá)情況。應(yīng)用qPCR及Western blot方法檢測耐順鉑人肺腺癌細(xì)胞株A549/DDP細(xì)胞經(jīng)XPA-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后XPA-mRNA及其蛋白的表達(dá)水平。通過MTT法檢測沉默XPA基因后A549/DDP的細(xì)胞凋亡情況及其對順鉑的敏感性。
　　 結(jié)果：
　　 1.肺癌及癌旁組織XPA表達(dá)免疫組化染色顯示，肺腺癌組織胞漿及胞核均表達(dá)XPA，鱗癌組織主要表達(dá)在胞漿內(nèi)。IOD

7、分析顯示，與癌旁組織比較，肺腺癌及鱗癌組織XPA表達(dá)均明顯增高。
　　 2.肺癌及癌旁組織XPA-mRNA及蛋白表達(dá)qPCR顯示肺腺癌及鱗癌組織XPA-mRNA表達(dá)均顯著高于相應(yīng)的癌旁組織。Western blot結(jié)果顯示，與癌旁組織比較，肺腺癌及鱗癌組織XPA蛋白表達(dá)亦明顯增高。
　　 3.沉默A549/DDP細(xì)胞株XPA基因效果檢測qPCR及Western blot結(jié)果顯示，A549/DDP細(xì)胞株經(jīng)XPA-shRNA

8、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后XPA-mRNA及蛋白的表達(dá)均較未處理組明顯降低。
　　 4.XPA基因表達(dá)水平對A549/DDP細(xì)胞凋亡的影響MTT法測定A549/DDP細(xì)胞轉(zhuǎn)染XPA-shRNA后A549/DDP細(xì)胞對順鉑的敏感性增加?？瞻捉M與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；轉(zhuǎn)染組與空白組、對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.XPA在肺腺癌和肺鱗癌組織中有較高的表達(dá)水平。
　　 2.沉默XPA可以促進(jìn)A54