DNMT3B表達(dá)抑制誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)基因表達(dá)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：分析DNMT3B表達(dá)抑制后腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)情況及其啟動子區(qū)甲基化狀態(tài),探討DNMT3B調(diào)控腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的可能機(jī)制。 方法：應(yīng)用實(shí)時熒光定量RT-PCR(Real-Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)方法分析肝癌細(xì)胞系SMMC-7721中DNMT3B表達(dá)抑制所誘導(dǎo)的發(fā)育和腫瘤發(fā)生相關(guān)的基因MTSS1、AREG、FADS1和NOTCH1的表達(dá),并以MSP(Methylated Spe

2、cific PCR,MSP)和亞硫酸氫鹽測序(Bisulfite Sequencing)的方法檢測上述腫瘤相關(guān)基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)。以組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA處理SMMC-7721細(xì)胞系,檢測組蛋白乙?；饔檬欠窨赡軈⑴c上述腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控。 結(jié)果：在肝癌細(xì)胞系SMMC-7721中,由RNA干擾所致的DNMT3B表達(dá)抑制誘導(dǎo)了5'端含CpG島的腫瘤相關(guān)基因MTSS1、AREG、FADS1、NOTCH1的表達(dá)

3、；對其啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)其甲基化狀態(tài)沒有發(fā)生明顯的改變；進(jìn)一步評價DNMT3B抑制前后MTSS1啟動子區(qū)69個CpG位點(diǎn)甲基化比率,發(fā)現(xiàn)DNMT3B表達(dá)抑制細(xì)胞系SMMC-7721-pMT3B中MTSS1啟動子區(qū)CpG位點(diǎn)甲基化比率為36.09％,SMMC-7721-sMT3B細(xì)胞系MTSS1啟動子區(qū)CpG位點(diǎn)甲基化比率為36.38％,二者無顯著性差異(P>0.05)。以TSA處理SMMC-7721細(xì)胞系后,發(fā)現(xiàn)

4、FADS1、AREG、NOTCH1呈現(xiàn)出不同程度的表達(dá)上調(diào),尤其是AREG在TSA處理后的SMMC-7721細(xì)胞系中呈明顯的表達(dá)上調(diào)。TSA處理SMMC-7721細(xì)胞系發(fā)現(xiàn),MTSS1出現(xiàn)了一定程度的表達(dá)下調(diào)。進(jìn)一步分析TSA處理是否影響了DNMTs的表達(dá),發(fā)現(xiàn)TSA處理24h即可見DNMT3B的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05),而DNMT1和DNMT3A則無此傾向。此外MTSS1表達(dá)的高低與DNMT3B的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān),即DNMT3

5、B表達(dá)低時,MTSS1表達(dá)高；反之,亦然。 結(jié)論：通過以上實(shí)驗(yàn)及結(jié)果,本研究得到以下結(jié)論： 1.DNMT3B表達(dá)抑制誘導(dǎo)了腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)。 2.SMMC-7721中,MTSS1表達(dá)的高低與DNMT3B的表達(dá)水平有關(guān)。 3.DNMT3B表達(dá)抑制誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)基因的表達(dá),但并沒有明顯地改變其啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)；DNMT3B可能通過不依賴于其甲基催化功能的方式調(diào)控腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)。 4.TSA處理影