精子蛋白17靶向腫瘤體內(nèi)成像研究.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：1 、堅(jiān)持以“求實(shí)、創(chuàng)新”的科學(xué)精神從事研究工作。2 、本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。3 、本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。4 、本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。5 、其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。研究生簽名： 銎垂紐日 期： 漁f 坌二皇= ≥l學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解

2、南京師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版；有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱；有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索；有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。 ．～研究生簽名： 毯圭塹．日 期： 鎏＆二堇：蘭f疊■r飛曩，llI 曩h?！鴕．I■k隅r●兩摘要摘 要l I I I I I I I

3、I I I I l l l I I I I l l l l 1 1 1、t17 2 6 0 2 7分子影像學(xué)是利用現(xiàn)有的成像技術(shù)早期發(fā)現(xiàn)疾病的分子變異，也可以利用特異探針無創(chuàng)性地檢測(cè)，從而在細(xì)胞與分子水平上評(píng)估被治療靶目標(biāo)的效果。實(shí)現(xiàn)真正意義上的分子影像學(xué)技術(shù)的三大要素為分子探針、信號(hào)放大和高靈敏探測(cè)儀。分子影像學(xué)利用分子探針一插入人體細(xì)胞內(nèi)一遇到特定基因產(chǎn)物或特定分子時(shí)一發(fā)射信號(hào)- - - P ET 、M R J 、C T 、光學(xué)成像

4、儀或紅外線記錄其信號(hào)一顯示圖像。精子蛋白1 7 ( s p e r m p r o t e i n1 7 ，S p l 7 ) 正常表達(dá)在人睪丸中的精母細(xì)胞、精子細(xì)胞以及成熟精子，在多發(fā)性骨髓瘤、卵巢癌等一些臨床惡性腫瘤細(xì)胞中異常表達(dá)，被候選為腫瘤免疫治療和分子診斷的新靶標(biāo)。即使正常組織有少量表達(dá)，也沒有明確的生理功能，而在多種惡性腫瘤組織中異常大量表達(dá)，且很少釋放到血循環(huán)中，是腫瘤活體內(nèi)顯像和生物治療的理想分子靶點(diǎn)，可以用來作為體內(nèi)分

5、子影像學(xué)診斷和免疫靶向治療的分子靶標(biāo)。在本研究第一部分，我們做T S p l 7 靶向腫瘤體內(nèi)外磁共振成像的研究。首先，在偶聯(lián)劑E D C ／N H S 作用下，將殼聚糖及硅烷修飾的磁性氧化鐵納米顆粒與純化的抗S p1 7 單克隆抗體結(jié)合，制備抗S p l 7 抗體免疫磁性納米顆粒( i m m u n o m a g n e t i c n a n o p a rt i c l e s ，I M P s ) ，并用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(

6、E L I S A ) 檢測(cè)了磁納米探針的免疫活性，結(jié)果表明成功實(shí)現(xiàn)了抗體與磁性納米顆粒的偶聯(lián)，并且n 烈P s 保持良好的抗體活性。然后，我們通過免疫細(xì)胞化學(xué)及流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)到肝癌細(xì)胞表面有S p l 7 異常表達(dá)，之后用肝癌細(xì)胞建立腫瘤動(dòng)物模型，免疫組織化學(xué)證實(shí)成功建立表達(dá)S p l 7 蛋白的腫瘤動(dòng)物模型；最后，將兩種S p l 7 抗體免疫磁性納米顆粒通過尾靜脈注入腫瘤裸鼠體內(nèi)，通過磁共振成像及普魯士藍(lán)染色比較靶向效果，結(jié)果顯

7、示a n t i ．S p l 7 ．C S @ M N P s 探針在動(dòng)物磁共振成像M R I 中的作用優(yōu)于a n t i ．S p l 7 ．S i l a n e @ M N P s 探針，具有更好的特異性。在本研究的第二部分，我們做Y S p l 7 靶向腫瘤體內(nèi)近紅外成像研究。首先，在偶聯(lián)劑E D C ／N H S 作用下，用一種新型生物相容性近紅外熒光染料吲哚花菁綠( i n d o c y a ai n eg r e e

8、n , I C G ) 的衍生物I C G ．D e r - 0 2 與S p l 7 單克隆抗體偶聯(lián)，形成免疫近紅外熒光探針，并用分光光度儀測(cè)定了樣品的光譜性質(zhì)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( E L I S A ) 檢測(cè)了近紅外熒光探針的免疫活性，結(jié)果表明成功實(shí)現(xiàn)了抗體與I C G ．D e r - 0 2 近紅外染料的偶聯(lián)，并且保持良好的抗體活性；然后，我們成功建立表達(dá)S p l 7 蛋白的腫瘤動(dòng)物模型；最后，將荷瘤小鼠分為2 組，分別經(jīng)尾靜