慢病毒介導的RNA干擾GDNF表達對大鼠乳腺癌致骨癌痛療效的研究.pdf

1、背景：骨癌痛在臨床上很常見，但機制尚不明確，目前的臨床治療手段多為藥物治療，遠不能滿足患者的需求，學者們轉而尋求生物治療。本研究旨在探索骨癌痛的發(fā)生機制，以期尋求新的鎮(zhèn)痛方法。
　　目的：
　　1)復制大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動物模型；
　　2)構建膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF) shRNA慢病毒重組體；
　　3)研究shRNA-GDNF對乳腺癌致骨轉移癌痛的療效；
　　4)研究shRNA-GDNF鎮(zhèn)

2、痛的可能機制。
　　方法：
　　1)復制大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動物痛模型，從疼痛行為學、骨損害形態(tài)學的角度來檢驗評價模型；
　　2)設計、構建慢病毒包裝的RNA干擾 GDNF重組體；
　　3)選擇骨癌痛模型復制成功的大鼠行鞘內(nèi)置管，隨機分為四組，分別給予鞘內(nèi)注射：生理鹽水；慢病毒包裝的RNA干擾GDNF重組體(psiHIV-GDNF-mU6)；慢病毒空載體(psiHIV-U6)；以及嗎啡。比較給藥前、后7d、1

3、4d時的大鼠熱痛閾、機械痛閾的變化。
　　4)應用免疫熒光染色、RT-PCR及Western-blot等技術檢測GDNF及星形膠質(zhì)細胞標志物GFAP、疼痛相關調(diào)質(zhì)P物質(zhì)（SP）、降鈣素基因相關肽(CGRP)和疼痛下游信號分子PERK、c-fos的表達水平。
　　結果：
　　1)大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動物模型復制成功；
　　2)慢病毒包裝的RNA干擾GDNF重組體構建成功；
　　3)注藥后7d時，各組機械痛

4、結果無差異。注藥后14d時，Lv-shRNA-GDNF組、嗎啡組機械痛閾值明顯較生理鹽水組及空載體對照組延長。注藥后7d、14d時Lv-shRNA-GDNF組與嗎啡組溫痛覺閾值較生理鹽水組及空載體對照組明顯延長。
　　4)骨癌痛大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞顯著活化，GFAP在生理鹽水組及空載體組表達增高，Lv-shRNA-GDNF組與嗎啡組表達下降至正常水平。
　　5) GDNF RNA干擾表達有效，GDNF表達水平顯著下降，Lv-

5、shRNA-GDNF組與嗎啡組鎮(zhèn)痛效果相似。
　　6)疼痛相關分子SP、CGRP、c-fos以及 PERK呈現(xiàn)一致變化趨勢，在生理鹽水組及空載體組表達增高，Lv-shRNA-GDNF組與嗎啡組表達下降至正常水平。
　　結論：
　　1)大鼠乳腺癌致脛骨骨癌痛的動物模型是有效的骨癌痛模型，同時再現(xiàn)了骨癌痛骨破壞和疼痛行為學變化的特點。
　　2)骨癌痛大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞顯著活化。
　　3)慢病毒包裝的RNA干擾