攜帶IRES序列的腺相關病毒載體的構建及表達.pdf

1、分類號：R318學校代碼：10392學號：2004284福建醫(yī)科大學碩士研究生畢業(yè)論文攜帶IRES序列的腺相關病毒載體的構建及表達ConstructionandexpressionofadenoassociatedvirusvectorcontainingIRESsequence所在院(系)：第一臨床醫(yī)學院研究生：顏素彬?qū)W科(專業(yè))：眼科學導師：林發(fā)森教授朱益華副教授研究起止日期：2005年9月至2006年12月二零零七年三月攜帶IRE

2、S序列的腺相關病毒載體的構建及表達摘要目的：構建一種含內(nèi)部核糖體進入位點(IRES)序列的腺相關病毒表達載體，用于簡便、快速地了解睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)基因在轉(zhuǎn)染細胞中的表達，為進一步探討CNTF對大鼠視網(wǎng)膜及視神經(jīng)的影響奠定基礎。方法：1采用PCR技術，在質(zhì)粒plRES中擴增IRES序列，利用基因重組技術將IRES序列構建到腺相關病毒載體pAAV—CNTFEGFP中。2重組質(zhì)粒pAAVcNT卜IREs—EGFP和兩種輔助質(zhì)粒pH

3、elper、pAAV—RC通過脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染AAV一293細胞，用熒光倒置顯微鏡檢測細胞中增強型綠色熒光蛋白(EGFP)的表達。3采用RT—PCR方法檢測CNTF基因的表達。結果：1重組的p從vcNTF—IRES—EGFP質(zhì)粒經(jīng)PCR篩選、酶切及測序鑒定證實構建成功。2在熒光倒置顯微鏡下觀察到增強型綠色熒光蛋白(EGFP)的表達。3采用lit—PCR方法在轉(zhuǎn)染的AAV293細胞中觀察到CNTFeDNA的特異條帶。結論：IRES序列調(diào)控CN