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1、一目的:1構(gòu)建腺相關(guān)病毒增強型小鼠白介素10質(zhì)粒(pORF-ITR-mIL-10)并進一步證實ITR能增加mIL-10在心肌細胞內(nèi)的表達,為體內(nèi)實驗提供必要的實驗依據(jù).二方法:1利用分子克隆技術(shù),將AAV中的ITR插在pORF5-mIL-10質(zhì)粒啟動子的上游,構(gòu)建pORF-ITR-mIL-10質(zhì)粒.2在陽離子脂質(zhì)體Lipofectin介導下,pORF5-mIL-10和pORF-ITRS-mIL-10分別轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)心肌細胞.3 Triz
2、ol一步法提取總RNA,RT-PCR檢測mIL-10的mRNA.4 ELISA檢測培養(yǎng)細胞上清中mIL-10的表達.三結(jié)果:1用雙酶切方法證實成功構(gòu)建pORF-ITR-mIL-10.2分別在轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h、120h后,用RT-PCR在心肌細胞中檢測到相應(yīng)的目的條帶.3 ELISA檢測顯示pORF-ITR-mIL-10的表達量明顯高于pORF5-mIL-10.四結(jié)論:1在陽離子脂質(zhì)體Lipofectin介導下,pORF
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