SREBPs及VEGF對辛伐他汀作用血管平滑肌細胞的調(diào)節(jié).pdf

1、目的:通過體內(nèi)和體外實驗觀察小劑量及大劑量辛伐他汀對大鼠動脈平滑肌細胞增殖和遷移的影響并觀察辛伐他汀對SREBPs、VEGF表達的調(diào)節(jié)，旨為探討他汀類藥物是否對VSMCs具有“雙向”作用及機制，并為他汀類藥物在臨床的應用提供進一步實驗依據(jù)。 方法: 1.體外原代培養(yǎng)大鼠VSMCs，觀察辛伐他汀對VSMCs增殖（ELASA方法）、遷移（刮傷實驗方法）的影響及SREBP-1、SREBP-2和VEGF的mRNA表達（RT-PC

2、R方法）。 2.體內(nèi)建立大鼠動脈粥樣硬化血管損傷模型，分為正常對照組（NC，n=8）、動脈粥樣硬化損傷組（AI，n=6）、低劑量辛伐他汀組（LS，n=6）和高劑量辛伐他汀組（HS，n=6）。每天一次灌胃給藥：劑量分別為辛伐他汀0.5mg·kg-1·d-1（LS），2.5mg·kg-1·d-1（HS），等量生理鹽水（NC，AI）。4周后處死動物，酶法測定各組血脂水平，檢測胸主動脈和左頸總動脈內(nèi)膜/（內(nèi)膜＋中膜）的比值，免疫組化檢測

3、VEGF在血管表達及血管內(nèi)膜細胞類型鑒定，RT-PCR方法檢測SREBP-1、SREBP-2和VEGF在血管的表達。 結果: 細胞試驗:1.與NC組（0.00μmol/L）比較，LS組（0.01μmol/L、0.05μmol/L、0.25μmol/L和0.50μmol/L）VSMCs增殖無統(tǒng)計學差異。HS組（10.0μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L和100μmol/L）除10.0μmol/L外均顯

4、示對VSMCs增殖抑制作用且呈時間及濃度依賴性。2.與NC組（0.00μmol/L）比較，低濃度辛伐他?。?.50μmol/L）組對VSMCs遷移無促進作用，高濃度辛伐他?。?0.0μmol/L）組明顯抑制VSMCs遷移。3.與NC組（0.00μmol/L）比較，低濃度辛伐他汀（0.50μmol/L）組VSMCs的SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達分別增加16.87％、5.62％，無統(tǒng)計學差異，高濃度辛伐他?。?0.0μmol

5、/L）組VSMCs的SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達分別增加52.80％、39.13％，有顯著統(tǒng)計學差異。4.與NC組（0.00μmol/L）比較，低濃度辛伐他?。?.50μmol/L）組VSMCs的VEGF mRNA表達增加6.11％，無統(tǒng)計學差異，高濃度辛伐他?。?0.0μmol/L）組VSMCs的VEGF mRNA表達減少22.32％，有統(tǒng)計學差異。 動物實驗:1. 辛伐他汀干預治療4周后，血漿TG和HDL-

6、C的水平各組間無統(tǒng)計學差異；與NC組比較，AI組LDL-C和TC水平升高，有統(tǒng)計學差異。和AI組比較，HS組的LDL-C和TC水平下降，但無統(tǒng)計學差異,而LS組的LDL-C和TC水平無差別。2.與NC組比較，AI組和LS組內(nèi)膜/（內(nèi)膜＋中膜）比值明顯增高（胸主動脈和左頸總動脈分別是54.01％、49.97％和173.29％、134.96％）。與AI組比較，LS組降低，但無統(tǒng)計學差異，HS組明顯降低（胸主動脈和左頸總動脈分別是32.18％

7、和33.16％）。3.血管內(nèi)膜細胞類型鑒定結果顯示絕大部分細胞是平滑肌細胞（α-SMA染色呈陽性反應）。 4.與NC組比較，AI組和LS組血管SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達分別下降38.67％、24.28％。與AI組比較，LS組SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達增加了23.46％、-2.19％，而HS組增加了90.38％、49.10％，有明顯統(tǒng)計學差異。5. VEGF在血管內(nèi)膜和中層平滑肌細胞表達。與NC組比較，

8、AI組和LS組血管VEGF表達明顯增加。與AI組比較，HS組血管VEGF表達明顯減少。6. 大鼠胸主動脈VEGF mRNA表達:和NC組比較，AI組和LS組分別增加32.27％、38.71％，有明顯統(tǒng)計學差異；和AI組比較，LS組無差別，而HS組表達減少33.83％，有明顯統(tǒng)計學差異。 結論:通過細胞和動物實驗得出以下結論： 1. 辛伐他汀對VSMCs增殖和遷移無雙向調(diào)節(jié)作用。小劑量辛伐他汀對VSMCs的增殖和遷移無促進