SREBPs及VEGF對(duì)辛伐他汀作用血管平滑肌細(xì)胞的調(diào)節(jié).pdf

1、目的:通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀察小劑量及大劑量辛伐他汀對(duì)大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響并觀察辛伐他汀對(duì)SREBPs、VEGF表達(dá)的調(diào)節(jié)，旨為探討他汀類藥物是否對(duì)VSMCs具有“雙向”作用及機(jī)制，并為他汀類藥物在臨床的應(yīng)用提供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1.體外原代培養(yǎng)大鼠VSMCs，觀察辛伐他汀對(duì)VSMCs增殖（ELASA方法）、遷移（刮傷實(shí)驗(yàn)方法）的影響及SREBP-1、SREBP-2和VEGF的mRNA表達(dá)（RT-PC

2、R方法）。 2.體內(nèi)建立大鼠動(dòng)脈粥樣硬化血管損傷模型，分為正常對(duì)照組（NC，n=8）、動(dòng)脈粥樣硬化損傷組（AI，n=6）、低劑量辛伐他汀組（LS，n=6）和高劑量辛伐他汀組（HS，n=6）。每天一次灌胃給藥：劑量分別為辛伐他汀0.5mg·kg-1·d-1（LS），2.5mg·kg-1·d-1（HS），等量生理鹽水（NC，AI）。4周后處死動(dòng)物，酶法測(cè)定各組血脂水平，檢測(cè)胸主動(dòng)脈和左頸總動(dòng)脈內(nèi)膜/（內(nèi)膜＋中膜）的比值，免疫組化檢測(cè)

3、VEGF在血管表達(dá)及血管內(nèi)膜細(xì)胞類型鑒定，RT-PCR方法檢測(cè)SREBP-1、SREBP-2和VEGF在血管的表達(dá)。 結(jié)果: 細(xì)胞試驗(yàn):1.與NC組（0.00μmol/L）比較，LS組（0.01μmol/L、0.05μmol/L、0.25μmol/L和0.50μmol/L）VSMCs增殖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。HS組（10.0μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L和100μmol/L）除10.0μmol/L外均顯

4、示對(duì)VSMCs增殖抑制作用且呈時(shí)間及濃度依賴性。2.與NC組（0.00μmol/L）比較，低濃度辛伐他?。?.50μmol/L）組對(duì)VSMCs遷移無促進(jìn)作用，高濃度辛伐他?。?0.0μmol/L）組明顯抑制VSMCs遷移。3.與NC組（0.00μmol/L）比較，低濃度辛伐他汀（0.50μmol/L）組VSMCs的SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達(dá)分別增加16.87％、5.62％，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，高濃度辛伐他?。?0.0μmol

5、/L）組VSMCs的SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達(dá)分別增加52.80％、39.13％，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4.與NC組（0.00μmol/L）比較，低濃度辛伐他?。?.50μmol/L）組VSMCs的VEGF mRNA表達(dá)增加6.11％，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，高濃度辛伐他?。?0.0μmol/L）組VSMCs的VEGF mRNA表達(dá)減少22.32％，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn):1. 辛伐他汀干預(yù)治療4周后，血漿TG和HDL-

6、C的水平各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與NC組比較，AI組LDL-C和TC水平升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。和AI組比較，HS組的LDL-C和TC水平下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而LS組的LDL-C和TC水平無差別。2.與NC組比較，AI組和LS組內(nèi)膜/（內(nèi)膜＋中膜）比值明顯增高（胸主動(dòng)脈和左頸總動(dòng)脈分別是54.01％、49.97％和173.29％、134.96％）。與AI組比較，LS組降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，HS組明顯降低（胸主動(dòng)脈和左頸總動(dòng)脈分別是32.18％

7、和33.16％）。3.血管內(nèi)膜細(xì)胞類型鑒定結(jié)果顯示絕大部分細(xì)胞是平滑肌細(xì)胞（α-SMA染色呈陽性反應(yīng)）。 4.與NC組比較，AI組和LS組血管SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達(dá)分別下降38.67％、24.28％。與AI組比較，LS組SREBP-1、SREBP-2 mRNA表達(dá)增加了23.46％、-2.19％，而HS組增加了90.38％、49.10％，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5. VEGF在血管內(nèi)膜和中層平滑肌細(xì)胞表達(dá)。與NC組比較，

8、AI組和LS組血管VEGF表達(dá)明顯增加。與AI組比較，HS組血管VEGF表達(dá)明顯減少。6. 大鼠胸主動(dòng)脈VEGF mRNA表達(dá):和NC組比較，AI組和LS組分別增加32.27％、38.71％，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；和AI組比較，LS組無差別，而HS組表達(dá)減少33.83％，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論:通過細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論： 1. 辛伐他汀對(duì)VSMCs增殖和遷移無雙向調(diào)節(jié)作用。小劑量辛伐他汀對(duì)VSMCs的增殖和遷移無促進(jìn)