p53基因表達下調(diào)調(diào)控涎腺腺樣囊性癌細胞SACC-83發(fā)生上皮間質樣轉化.pdf

1、腺樣囊性癌（ACC）是一種臨床常見的口腔頜面部惡性腫瘤，發(fā)病率占所有唾液腺腫瘤的10％左右，占所有唾液腺惡性腫瘤22％，占所有的頭部和頸部惡性腫瘤約1％。小唾液腺及口腔是最常見的發(fā)病位點。ACC具有嗜神經(jīng)侵襲（PNI）的特性，該特性是臨床診斷和治療ACC的一個難點。上皮間質轉化（EMT）是指細胞由上皮形態(tài)轉化為間質形態(tài)，是一個快速且通?？赡娴募毎硇偷母淖儯壳耙驯粡V泛引入腫瘤的發(fā)生發(fā)展研究中來。p53基因是一個公認的抑癌基因，國際癌癥

2、研究機構（IARC）p53數(shù)據(jù)庫中含有超過26,000個體細胞突變型p53基因。不同腫瘤中p53基因突變的發(fā)生率不同，造血系統(tǒng)惡性腫瘤p53突變率約為10％，而卵巢癌、大腸癌、頭頸部惡性腫瘤的突變率為50-70％。在本課題組前期的研究中發(fā)現(xiàn)，涎腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲基因表達譜中p53基因存在表達下調(diào)的情況，另有文獻報道53基因可以調(diào)控乳腺癌細胞的EMT過程。因而揭示p53、EMT、涎腺腺樣囊性癌PNI之間的相互關系在ACC的PNI研究和

3、臨床治療中就產(chǎn)生了重要意義。
　　目的：
　　1．通過RNA干擾實驗探明P53基因是否可以調(diào)控ACC發(fā)生EMT。
　　2．通過實驗探索p53基因與涎腺腺樣囊性癌PNI之間的關系。
　　方法：
　　1．通過Real time-PCR、Western blot技術篩選出p53基因RNA干擾的最佳干擾片段。
　　2．通過RNA干擾技術降低涎腺腺樣囊性癌細胞系SACC-83細胞中p53基因的表達，并利用Wes

4、tern blot和流式細胞術檢測EMT典型細胞表面標志物的表達情況，從而明確p53基因是否可以調(diào)控涎腺腺樣囊性癌細胞系SACC-83細胞發(fā)生EMT。
　　3．使用MTT細胞活性檢測方法探明p53基因表達降低對S ACC-83細胞活力的影響
　　4．使用流式細胞術和Annexin V-FITC&PI凋亡檢測試劑盒探明p53基因表達降低對SACC-83細胞抗凋亡能力的影響。
　　5．通過Transwell小室細胞遷移實驗

5、和劃痕實驗探明p53基因表達降低對SACC-83細胞體外嗜神經(jīng)遷移能力的影響。
　　6.通過改良Transwell小室細胞侵襲實驗探明p53基因表達降低對SACC-83細胞體外嗜神經(jīng)侵襲能力的影響。
　　結果：
　　1.成功篩選出p53基因RNA干擾最佳片段p53-homo270。
　　2. RNA干擾降低p53基因表達可以誘導SACC-83發(fā)生EMT樣轉化。
　　3. EMT樣轉化后的SACC-83細胞具

6、有更強的細胞活力和抗凋亡性。
　　4. EMT樣轉化后的SACC-83細胞具有更強的體外嗜神經(jīng)遷移和侵襲能力。
　　結論：
　　1. p53基因可能通過表達降低誘導涎腺腺樣囊性癌細胞系 SACC-83發(fā)生上皮間質樣轉化；
　　2. p53基因表達降低誘導產(chǎn)生的EMT樣SACC-83細胞表型具有高表達間質細胞表型標志物Vimentin、N-Cadherin和C-Cadherin，低表達上皮細胞標志物E-cadher