耐碳青霉烯類腸桿菌的耐藥機(jī)制及基因分型的研究.pdf

1、目的:
　　由于臨床上抗生素的不合理使用，使得耐碳青霉烯腸桿菌逐年增多。研究我院耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌的耐藥機(jī)理，以及基因分型，進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查，為我院預(yù)防和控制耐碳青霉烯類腸桿菌的感染和暴發(fā)流行及指導(dǎo)臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　篩選2011年1月到2014年11月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，對(duì)亞胺培南、美羅培南、厄他培南耐藥的97株腸桿菌科菌株（即耐碳青霉烯腸桿菌CRE）。用西門子Microsca

2、n Walkway96SI全自動(dòng)藥敏檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定，常規(guī)藥敏檢測(cè)，對(duì)初篩的產(chǎn)碳青霉烯酶菌株進(jìn)行改良Hodge實(shí)驗(yàn);提取細(xì)菌基因組DNA，PCR擴(kuò)增碳青霉烯酶基因（KPC、VIM、IMP、GES、OXA-48等）;對(duì)整合子、ISCR1耐藥元件及其攜帶的可變區(qū)耐藥基因、復(fù)雜性整合子進(jìn)行檢測(cè)，PCR陽(yáng)性產(chǎn)物測(cè)序（可變區(qū)陽(yáng)性產(chǎn)物先用限制性內(nèi)切酶HinfI酶切，選取不同類型的酶切圖譜的產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序），從而了解我院CRE整合子、ISCR1攜帶

3、耐藥基因的類型及分布特征;對(duì)臨床分離的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌，建立ERIC-PCR基因分型方法，進(jìn)行分子流行病學(xué)研究，為臨床控制細(xì)菌感染及院感監(jiān)測(cè)提供指導(dǎo)依據(jù)。
　　結(jié)果:
　　1.97株耐碳青霉烯類腸桿菌中，包括69株肺炎克雷伯菌，20株大腸埃希菌，3株產(chǎn)酸克雷伯菌，2株奇異變形桿菌，1株產(chǎn)氣腸桿菌，1株枸櫞酸桿菌，1株聚團(tuán)桿菌。
　　2.39株細(xì)菌改良Hodge實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。
　　3.碳青霉烯酶基因擴(kuò)

4、增結(jié)果顯示:32株細(xì)菌KPC基因陽(yáng)性、陽(yáng)性率為33％;21株細(xì)菌VIM基因陽(yáng)性、陽(yáng)性率為21.6％;9株細(xì)菌IMP基因陽(yáng)性，陽(yáng)性率為9.3％。GES、OXA-48基因均為陰性。
　　4.97株CRE中，62株細(xì)菌IntI陽(yáng)性，陽(yáng)性率為63.9％;46株IntI可變區(qū)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為74.2％; intI可變區(qū)攜帶的耐藥基因盒組合方式有5種:32株攜帶aadA1，2株攜帶dfrA15，6株aac6+arr3+drf27+aadA16，

5、2株aac6，4株aadA2+aadB。
　　5.56株細(xì)菌orf513陽(yáng)性，陽(yáng)性率為57.7％。其中16株ISCR攜帶的耐藥基因陽(yáng)性，陽(yáng)性率為28.6％，ISCR可變區(qū)攜帶的耐藥基因盒的組成方式為三種:2株肺炎克雷伯菌攜帶ISCR+qnrB6+qacE1+sulI，4株肺炎克雷伯菌攜帶ISCR+qnrA1+qacE1+sulI，其余10株攜帶ISCR+qnrB2+qacE1+sulI，包括7株肺炎克雷伯菌，一株大腸埃希菌，一株枸

6、櫞酸桿菌，一株產(chǎn)酸克雷伯菌。
　　6.同時(shí)攜帶整合子和ISCR的18株細(xì)菌中，有三株肺炎克雷伯菌既攜帶整合子可變區(qū)又含有ISCR可變區(qū)，耐藥基因組合方式為:intI+aadA1+qacE1+sulI+ISCR+qnrB2+qacE1+sulI。
　　7.ERIC結(jié)果表示:耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌存在7個(gè)基因型在重癥ICU和急診科主要存在2種基因型，耐碳青霉烯酶大腸埃希菌存在8個(gè)基因型，均散在分布在臨床各個(gè)科室。
　　結(jié)

7、論:
　　1.本研究中產(chǎn)碳青霉烯酶菌株主要為肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌，碳青霉烯酶基因主要為KPC型和VIM型。
　　2.本研究中整合子主要介導(dǎo)對(duì)氨基糖苷類抗生素的耐藥;ISCR主要介導(dǎo)喹諾酮類抗生素的耐藥;復(fù)雜性整合子介導(dǎo)多重耐藥。本研究中耐碳青霉烯類腸桿菌整合子、ISCR耐藥元件陽(yáng)性的菌株，并沒(méi)有攜帶碳青霉烯酶基因。
　　3.本研究中耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌主要分布在重癥醫(yī)學(xué)科和急診科，以耐碳青霉烯酶的肺炎克雷伯桿菌