銀杏葉類脂分離、衍生物合成及其生物活性研究.pdf

1、銀杏葉類脂主要包括烴類、聚戊烯醇類、萜烯醇類、甾醇類等化合物，聚戊烯醇類脂具有抗病毒、提高免疫功能、肝細(xì)胞再生、抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移等生物活性，是生物體糖蛋白生物合成的重要載體。目前國內(nèi)有關(guān)銀杏葉活性物的研究主要集中在黃酮、萜內(nèi)酯等方面，而具有生理活性的類脂化合物研究與開發(fā)很少。本文系統(tǒng)開展銀杏葉類脂的化學(xué)成分研究，分離和制備聚戊烯醇及其衍生物，進(jìn)一步評價銀杏葉類脂抑菌和抗氧化生物活性，為銀杏葉資源生物活性成分的綜合利用，為促進(jìn)銀杏葉新產(chǎn)品的

2、開發(fā)提供理論應(yīng)用依據(jù)和技術(shù)支撐。
　　 通過溶劑提取，皂化等方法制備銀杏葉類脂成分，再利用冷凍以及分子蒸餾得到結(jié)晶物，輕餾分和重餾分部位，并結(jié)合多種色譜技術(shù)首次對其各部位進(jìn)行系統(tǒng)分離;對類脂輕餾分進(jìn)行Py-GC-MS分析，結(jié)果:裂解后化合物中單萜和倍半萜類化合物約為23％;長鏈醇（酮、酯）及二萜類化合物含量約為47％;烷基酚、甾體類化合物含量約為30％;從銀杏葉類脂成分的結(jié)晶物、分子蒸餾輕餾分和重餾分部位中分離得到了15個單體化

3、合物，其中β-谷甾醇乙酯、棕櫚酸酰胺、三棕櫚酸甘油酯、正十一烷、β-石竹烯、異植物醇、橙花叔醇、芳樟醇和松油醇是首次從銀杏葉中分離得到。
　　 對聚戊烯醇α-終端單元的-OH基團(tuán)進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾:通過乙酸酐酯化反應(yīng)合成得到聚戊烯基乙酸酯(GPA)，得率為91％;利用格氏試劑合成正戊基溴化鎂作為中間體，與聚戊烯醇偶合反應(yīng)合成正戊烷基聚戊烯(GAP)，得率為90％;利用格氏試劑合成(R)-4-芐氧基-2-甲基-1-丁基溴化鎂作為中間

4、體，與聚戊烯醇偶合反應(yīng)合成聚戊烯基-3-異戊基芐醚(GPB)，得率為86％;利用三氯氧磷作為磷?；瘎?，在堿性條件下將聚戊烯醇磷?；癁榫畚煜┗攘姿狨?GPD)，得率為90％;聚戊烯基二氯磷酸酯(GPD)經(jīng)過堿水解生成聚戊烯基單磷酸酯，繼而經(jīng)過無機(jī)堿成鹽為聚戊烯基磷酸酯二鈉鹽(GPP)，得率為79％。利用光譜學(xué)對以上5種衍生物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。
　　 利用濾紙片法測定樣品抑菌圈值，確定MIC、MBC、MFC值和FIC值等指標(biāo)，首次

5、考察了銀杏葉聚戊烯醇和15種類脂成分以及5種聚戊烯醇衍生物對5種不同菌種（沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌）的抑菌及協(xié)同作用。橙花叔醇對4種細(xì)菌（沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌）的抑菌活性最強(qiáng)，芳樟醇對黑曲霉菌的抑菌活性最強(qiáng)。當(dāng)β-石竹烯與銀杏葉聚戊烯醇質(zhì)量百分比為43.4∶56.58時，抗枯草芽孢桿菌協(xié)同作用最佳;當(dāng)異植物醇與銀杏葉聚戊烯醇質(zhì)量百分比為38.19∶61.81時，抗沙門氏菌協(xié)同

6、作用最佳。聚戊烯醇衍生物中GPD對5種菌種的抑菌活性最強(qiáng)，銀杏葉聚戊烯醇與GPP質(zhì)量百比為62.59∶37.41時，抗沙門氏菌協(xié)同作用最佳。
　　 通過柱層析分離，對銀杏葉類脂分子蒸餾輕、重集分分別梯度洗脫，得到不同極性集分;利用DPPH、ABTS、超氧陰離子自由基和羥自由基法，結(jié)合Sigmoidal擬合曲線法計算不同極性集分的IC50，首次評價了類脂不同極性集分抗氧化性，結(jié)果表明輕餾分中集分2（95％石油醚/5％乙酸乙酯部位）